论文部分内容阅读
心脏直视手术中,心肌缺血性损伤和再灌注损伤是影响术后心脏功能恢复的重要因素,心肌保护一直是心血管外科领域的研究重点。随着近年来对心肌ATP 敏感钾离子通道研究的不断深入,发现开放心肌KATP通道可对缺血再灌注心肌起到重要的保护作用,逐渐成为心肌保护研究新的热点。研究发现:心肌线粒体和内皮细胞结构及功能的损伤在缺血再灌注损伤机制中起重要的作用。心脏直视手术中心肌缺血及再灌注可导致线粒体和内皮细胞损伤及功能紊乱,从而通过不同途径引起细胞结构和功能失调。由此可以推断,围手术期加强对心肌线粒体和内皮细胞的保护,可以减轻心肌缺血再灌注损伤,促进术后心脏功能的恢复。国内外研究提示K+通道开放剂预处理可能减轻心肌缺血再灌注损伤,改善心肌保护效果。目的:本研究通过动物模型的制备,观察线粒体K+通道开放剂二氮嗪对缺血再灌注心肌线粒体、内皮细胞结构和功能,以及心肌结构和功能的影响,探讨其心肌保护作用及机制。方法:本研究采用Langendorff 离体心脏灌注模型和大鼠离体工作心脏灌注模型,分三部分进行。第一部分,SD 大鼠50 只,随机分为五组,制备Langendorff 大鼠离体心脏灌注模型,A 组为正常对照;B 组停灌30min,复灌30min;其余各组分别灌注不同的停搏液:C 组灌注高钾停搏液;D 组灌注含二氮嗪的停搏液;E 组灌注含二氮嗪停搏液之前10min 给予格列苯脲。实验终了取心肌组织,部分心肌制病理切片,电镜下观察线粒体改变;部分心肌用差速离心法提取线粒体并进行检测。采用紫外分光光度法检测细胞色素氧化酶活性,RT-PCR 检测其mRNA 表达变化;分别采用定磷法、高效液相法、激光共聚焦显微镜扫描、免疫组化和放免法检测H+-ATP 酶活性、心肌ATP 含量、线粒体膜电位、细胞色素C 含量、自由基生成。第二部分,新西兰白兔50只,随机分组,制备Langendorff 离体心脏灌注模型。A 组为正常对照;B 组停灌30min, 复灌30min;其余各组分别灌注不同的灌注液:C 组灌注含血灌注液;D 组灌注含二氮嗪的含血灌注液;E 组灌注含二氮嗪灌注液之前10min 给予格列苯脲。实验终了取心肌组织,免疫组化检测细胞间粘附分子-1 表达;RT-PCR 检测其细胞间粘附分子-1mRNA 表达变化;放免法检测肿瘤坏死因子-a、一氧化氮、血小板活化因子、髓过