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目的比较经不同途径移植骨髓间充质干细胞(BMSCs)治疗大鼠急性心肌梗死(AMI)的修复作用,探求更为适合的移植途径。方法1运用全骨髓贴壁法培养细胞和纯化细胞,取P3代生长良好的细胞,进行免疫细胞化学方法检测,骨髓间充质干细胞的表面标志物CD34、CD44。2骨髓间充质干细胞的诱导、鉴定和标记:5-氮胞苷作为诱导剂将骨髓间充质干细胞向心肌样细胞方向诱导,诱导后免疫细胞化学法进行细胞鉴定,心肌细胞表面标志物c Tn T。移植前1 h应用4,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)标记细胞核。3 SD大鼠AMI模型的建立及鉴定:采取结扎大鼠冠状动脉前降支的方式,建立AMI的大鼠模型。心电图可见肢体导联ST段呈弓背向上抬高继而出现异常Q波,结扎血管所供应的心肌组织变苍白,梗死心肌的形态观察,可鉴定为造模成功。4经不同途径移植心肌样细胞:将造模成功的大鼠分为4组,每组10只:1)对照组AMI后不予处理;2)静脉移植组为AMI后经尾静脉移植心肌样细胞悬液200ml(心肌样细胞5×106);3)心外膜移植组为AMI后于梗死周边区均匀分4个部位移植心肌样细胞悬液共200 ul,每个部位50 ul;4)联合移植组为AMI后分别经尾静脉和心外膜移植心肌样细胞悬液各200 ul。4周后称取大鼠体重和左心室重量,苏木精-伊红染色方法观察SD大鼠心肌组织形态,荧光显微镜下观察移植细胞的分布情况,免疫印迹法分析心肌组织蛋白ACE2的表达情况。所得数据均以x±s表示,采用SPSS17.0版本的软件对数据资料统计分析。多个均数间比较采用单因素方差分析。进一步两两比较采用LSD检验法,P<0.05为差异有统计学意义。结果1骨髓间充质干细胞培养24h后,显微镜下见大量悬浮细胞,折光性强,培养液浑浊,少量细胞贴壁生长,形态多样;随着培养基不断更换,细胞形态发生不断变化,最终呈漩涡状生长,形态较均一,呈梭形。传代48h后,由于胰酶作用,部分细胞皱缩、脱壁,导致悬浮细胞较多,贴壁细胞减少;之后,细胞恢复形态,数量逐渐升高,第7d时,细胞数量达到最多。细胞形态更加均一,呈短梭形。取P3代细胞,进行免疫细胞化学鉴定,骨髓间充质干细胞表面标记物CD44表达阳性,CD34表达阴性。2诱导P3代骨髓间充质干细胞,采用5-氮胞苷向心肌样细胞定向诱导,但生长速度较诱导前慢,开始出现细胞集落融合;4w后,细胞体积变大,呈长梭形,排列方向趋于一致。诱导后的细胞免疫组织化学染色显示,c Tn T表达阳性。3结扎大鼠冠状动脉前降支,可见结扎部位以下心肌变苍白,心电图提示ST段抬高,组织切片显示心肌纤维排列紊乱,甚至断裂,细胞核破裂,纤维组织增生。4各移植组的左心室重量指数较对照组均下降,差异有统计学意义(P<0.05),联合移植组的左心室重量指数较静脉移植组、心外膜移植组的下降,差异有统计学意义(P<0.05)。5被DAPI标记的骨髓间充质干细胞移植入大鼠体内,在荧光显微镜下观察,心肌样细胞核呈蓝色圆形或椭圆形荧光,静脉移植组大鼠心肌内可见少量散在分布的阳性细胞,心外膜移植组可见梗死心肌周边阳性细胞数量较多,联合移植组阳性细胞数量最多。6苏木精-伊红染色显示对照组(即单纯心肌梗死组)大鼠的心肌纤维排列紊乱甚至断裂、消失,细胞核破裂,纤维组织增生多;静脉移植组、心外膜移植组心肌纤维排列较乱,细胞核破裂数目较少,少量纤维组织增生;联合移植组心肌纤维排列尚整齐,少量细胞核肥大,纤维组织增生较多,与正常组织界限清晰。正常心肌组织切片显示心肌纤维排列有序,细胞核完整,无纤维组织增生。7免疫印迹分析结果显示,静脉移植组、心外膜移植组、联合移植组大鼠心肌组织ACE2表达水平较对照组升高,差异有统计学意义(P<0.05);联合移植组明显高于其他各组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论1经静脉移植和心外膜移植骨髓间充质干细胞均能促进梗死部位的组织修复;2经静脉和心外膜两种方式联合移植骨髓间充质干细胞促进梗死部位的组织修复,抑制心室重构效果更显著。