研究一、EGF对AP大鼠保护作用机理的实验研究 目的：检测表皮生长因子（EGF）对急性胰腺炎（AP）大鼠腹水量、血清淀粉酶、胰腺组织形态学改变的影响，以及EGF对AP大鼠空肠和胰腺凋亡指数、丙二醛（MDA）含量的影响，探讨EGF对AP大鼠保护作用的机理。方法：SD大鼠72只，采用戊巴妥钠(35mg·kg^-1)腹腔注射麻醉，常规消毒，无菌技术作腹正中切口，找到胰胆管，分别于入十二指肠及出肝门端用小动脉夹暂予阻闭，于肝 第四军医大学博士学位论义门端将 4号头刺入胰胆管，恒压下 1分钟内注入 3 5 mg ．L‘牛磺胆酸钠Q．0ml叶g‘人穿刺部位以生物蛋白胶封闭，注闭5 min后去除胰胆管两端动脉夹，诱导AP模型，逐层关腹。大鼠诱导AP模型后，随机分为3组：对照组（仅开腹翻动胰腺，n＝24）、AP组（n＝24）及吁－EGF组（n＝24），AP－EGF组动物在导致M 模型后皮下注射EGF O．lp g·g‘体重，其余两组动物皮下注射与EGF相同体积的生理盐水。动物每次有8只分别于术后6h、12h、24h剖杀取材，经心脏取血2ml，采用全自动生化分析仪检测血清淀粉酶，以干纱布吸沾腹水，腹水量为浸满腹水的纱布重量与干纱布之差。各时相剖腹作大体观察，采取相同部位的胰腺组织检测胰腺MDA含量，并观测胰腺组织学改变和细胞凋亡。同时从屈氏韧带远侧 10 cm处开始取 Zcm空肠，观测空肠组织细胞凋亡；另取 10 cm空肠，以预冷的生理盐水冲洗干净肠内容和血迹，滤纸吸干多余水分及粘液，在冰面上用玻片刮取空肠粘膜，检测空肠粘膜MDA含量。结果：1．AP＋EGF组动物病理形态损伤较AP组轻微；2．术后 12h及24h，AP－EGF组动物腹水量（4．53士1．29 SS6．78土1．47，7＊8士1．85 vs 11．96士2二3，g）显著低于AP组 －3－ 第凹军医大学博士学位论义 （P＜0＊5，P＜0＊1），AP－BGF组动物血清淀粉酶（＊2．0士8．3 vs 187．9士10．4，194．3士10．4 vs 253．3士8．6）也显著低 于 AP组（P＜0．05，P＜0．of）； 3．术后 24h，AP－EGF组动物血浆（1．85土0．29。2 12士0．27，2．34士0．23。3．15士0．38，11＊。l·s＼ P＜0刀5）、空肠（1互 士0二svsl．31士0．24，1．48士 0．32 g 2．15士 0．57，11 mol·g＼ P＜0刀5）及胰腺（4石9士l。28 vs 5＊ 士1．54，5．ZI士1．46 vs 7石8士1．63，u mol．g1，P＜0＊5）组织MDA含量均显著低于M 组；4．术后各时相，APEGF组动物胰腺组织凋亡指数显著高于吁组 门．22士3．53 vs 7．35士1刀4，11．67士2．40 vs 481士0．86，6．38土1．＊vsl．97士0．21，％，P＜0＊1)，术后12h及2＊，空肠粘膜凋亡指数却显著低 于” 组（2．15 f 0．26 VS 4，78士O．39，5．71士1．34 vs 9．56士2．01，％，P＜0口1）。结论：1．穿刺胰胆管顺行注射牛磺胆酸钠诱导AP的方法简单易行，便于操作，模型稳定，重复性好，是一种研究AP病因学和发展机理的可靠模型。LEGF能促进胰腺细胞的损伤修复，减轻AP时动物胰腺的病理形态损伤，改善AP时因胰腺微循环损害所致的胰腺出血及水肿，减少腹腔内渗出，迅速恢复血清淀粉酶正常活性。3．EGF可 －4－ 第四军医大学博士学位论文明显降低AP大鼠血浆、胰腺及肠粘膜组织MDA含量，减轻AP时氧自由基的损害作用。4．EGF可通过诱导AP时腺体细胞的凋亡发挥对胰腺的保护作用，并能减轻AP所致的肠粘膜细胞凋亡损害。