论文部分内容阅读
背景与目的结直肠癌(colorectal cancer, CRC)是很常见的恶性肿瘤,在西方发达国家其发病率已居恶性肿瘤的第2位,近几年来我国结直肠癌的发病率也逐年升高,甚至跃居第3位,尤其是在城市,有研究以HNPCC家族成员为研究对象认为,对于患结直肠癌的风险,男性突变的携带者远远高于女性突变携带者；大量的临床和流行病学研究也证实雌激素有预防结直肠癌的效果,有研究认为雌激素通过雌激素受体β (estrogen receptor β, ERβ)诱导结肠癌细胞凋亡可能是其机制之一,但是细胞凋亡机制较为复杂,其具体机制还不是很清楚,研究发现错配修复基因参与多种DNA损伤介质(顺铂、烷基化剂、5-氟尿嘧啶等)诱导的结肠癌细胞凋亡,但是对于错配修复基因是否参与雌激素诱导的结肠癌细胞凋亡及其机制目前还没有相关报道,本课题前期的研究发现雌激素能通过上调结直肠癌colo205细胞hMLH1基因的表达,从而增强错配修复功能,因此,我们认为雌激素对该基因的影响可能是雌激素预防结直肠癌的机制之一,本研究旨在探讨错配修复基因hMLH1在雌激素诱导结肠癌细胞凋亡中的作用。材料与方法：将含野生型hMLH1-cDNA的质粒转入hMLH1缺陷的人结肠癌细胞株HCT116中,用western bloting实验检测细胞转染效率,转染成功后在不同浓度的雌激素干预下,分别用流式细胞技术、活细胞计数试剂盒、DAPI染色方法、western bloting检测凋亡蛋白等方法检测转染前后细胞的凋亡情况。结果：成功将pcmv-hMLH1及pcmv-sport6转入HCT116细胞中,与空载组相比,hMLH1转染后雌激素能诱导HCT116细胞活性显著低于空载组,而凋亡率明显.增加,DAPI染色结果显示10-8雌二醇处理MLH1转染后细胞凋亡显著高于空载组,caspase3及caspase9检测结果也提示MLH1β日性表达组与对照组相比明显被激活裂解为小的有活性片段。结论：错配修复基因hMLH1参与并促进了雌激素诱导的结肠癌HCT116细胞株的凋亡