产气荚膜梭菌病是一种对养殖业有着严重危害的突发性、猝死性疾病,在全世界均有流行。其传统实验室检测方法耗费时间长且不能进行分型,对于该病的诊断、防治等方面存在着一定的局限性。因此,建立一种高效、准确、快捷的检测方法就显得极为重要。随着抗生素作为添加剂在饲料中的全面禁用,对于养殖行业在细菌性疾病的防治方面提出了新的挑战。而噬菌体裂解酶作为一种具有高度特异性、高效性的细菌裂解蛋白,在“后抗生素时代”又重新登上了舞台。根据GenBank上公布的产气荚膜梭菌α、β、ε、ι毒素的基因序列,设计、合成出了四对针对四种毒素的特异性引物。并通过改变引物浓度、退火温度等反应条件,对多重PCR方法进行优化。结果表明,α、β、ε、ι毒素基因均扩增出了预期大小的目的条带,而金黄色葡萄球菌、多杀性巴氏杆菌、停乳链球菌、肺炎克雷伯菌、大肠杆菌均未出现条带;当核酸浓度降至12.5 ng/mL时,仍可清晰的扩增出α、β、ε、ι毒素基因相对应的条带。在核酸浓度降至3.12ng/mL时,α与ε毒素基因扩增出的条带仍可被观察到。应用该方法对采自于宁夏17个牧场68份疑似产气荚膜梭菌导致猝死的牛的鼻拭子样品进行检测,其中有52份样品检测结果显示为C型产气荚膜梭菌,剩余16份样品检测结果为阴性,阳性率为76%。人工合成产气荚膜梭菌噬菌体裂解酶CP3626基因,并根据毕赤酵母表达系统密码子偏好性进行优化。构建PPICZα-3626表达载体,电转至毕赤酵母X-33感受态中并对其诱导表达条件进行优化;将浓缩纯化后的目的蛋白CP3626对A、B、C、D、E型产气荚膜梭菌进行体外抑菌试验检测其抑菌活性。结果表明,本试验成功构建了目的蛋白表达菌株X-33-3626。并且确定了在诱导条件为:温度29℃、诱导时间48 h、甲醇添加量0.5%时,目的蛋白CP3626的表达量最高,其浓度为627 μg/mL。目的蛋白体外裂解活性检测结果表明当目的蛋白终浓度为25 μg/mL时,目的蛋白对A、B、C、D、E型产气荚膜梭菌标准菌株均展现出了抑菌效果。Kirby-Bauer纸片扩散试验结果表明,由目的蛋白制作的药敏片对A、B、C、D、E型产气荚膜梭菌标准菌株均存在不同程度的抑制效果。