仙台病毒缺损干扰颗粒抗大鼠脑胶质瘤初步研究

来源 :天津医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:huangtongfeng
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目的:鉴于仙台病毒Tianjin株对成年人的低致病性,以及先前的实验表明仙台病毒其它基因型对肿瘤有抑制作用。本课题拟通过仙台病毒Tianjin株缺损干扰颗粒对肿瘤细胞的生物学影响,探索不必外源基因的表达载体和不必具有直接溶瘤能力的病毒,利用仙台病毒Tianjin株缺损干扰颗粒辅助治疗肿瘤的方法。并且初步研究其治疗肿瘤的机理,以期为肿瘤治疗提供新的思路。方法:1.敏感细胞的筛选:向所选定的癌细胞株:A549、MEL526、Libr、C6、 HT2、SW480、A498接种活仙台病毒Tianjin株,通过细胞CPE、细胞成活率、细胞凋亡、细胞培养液TCID50、PCR等形态学、生物学和分子生物学方法确定对该病毒敏感的细胞系。2.仙台病毒Tianjin株缺损干扰颗粒的制备:仙台病毒Tianjin株通过鸡胚培养法扩增,超速离心纯化仙台病毒Tianjin株活病毒,超速离心蔗糖密度梯度分离缺损干扰颗粒,提纯出的缺损干扰颗粒使用鸡胚培养法验证是否能够继续增殖,如果不能增殖则为仙台病毒Tianjin株缺损干扰颗粒。3.使用仙台病毒Tianjin株缺损干扰颗粒按不同浓度接种DC细胞,检测DC细胞产生IL-6、TNF-α、IFN-α等有抗肿瘤作用的细胞因子的量,验证仙台病毒Tianjin株缺损干扰颗粒刺激DC细胞抗肿瘤的能力。4.使用确定出的敏感细胞系接种适宜的动物,制作荷瘤动物模型。肿瘤内接种仙台病毒Tianjin株缺损干扰颗粒,通过直接测量肿瘤大小、细胞因子检测、PCR、免疫组化等方法评估仙台病毒Tianjin株缺损干扰颗粒治疗肿瘤的可行性,并初步确定治疗的机理。结果:大鼠脑胶质瘤细胞C6株对仙台病毒Tianjin株最具高度敏感性,病毒TCID50达到11.24+0.08.其它被测试细胞株均未达到此值,一般在0-3之间。由此确定实验动物为大鼠,品种为Wistar大鼠。在促进DC细胞体外增值实验中,与对照组比较,仙台病毒Tianjin株缺损干扰颗粒可以刺激DC细胞产生抗癌作用的细胞因子,IL-6、TNF-α、IFN-α有明显升高(均为P<0.001)。在大鼠体内实验中,与对照组比较,仙台病毒Tianjin株缺损干扰颗粒可以刺激正常大鼠高表达有抗癌作用的细胞因子,IL-6、TNF-α、IFN-α有明显升高(均为P<0.001)。大鼠脑瘤模型造模失败。结论:大鼠脑胶质瘤细胞C6株对仙台病毒Tianjin株高度敏感。仙台病毒Tianjin株接种C6细胞后可引起细胞明显病变,促进凋亡,并且作用持续。仙台病毒Tianjin株缺损干扰颗粒可以促进树突细胞成熟,高表达抗癌物质,有助于消除肿瘤。仙台病毒Tianjin株缺损干扰颗粒可以刺激正常大鼠高表达有抗癌作用的细胞因子,对大鼠脑胶质瘤应该有潜在的治疗作用。但是大鼠荷瘤失败,对活体肿瘤的直接作用效果未得到论证,有待进一步研究。
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