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放线菌LA5菌株是从海南辣椒植株上分离获得的一株生防菌,其产生的抗生素对辣椒疫霉菌、香蕉枯萎病菌、香蕉炭疽病菌、芒果炭疽病菌和稻瘟菌等多种植物病原真菌具有强烈的拮抗作用,其发酵液在盆栽试验中对辣椒疫病具有90%的防治效果。从LA5菌株发酵液中分离纯化出的抗生素粗提物有水溶性和脂溶性两类,水溶性类的结晶呈淡黄色、柱状,对光、热和冷藏稳定,抗真菌谱广,其水溶液在270nm附近有最大紫外吸收峰;脂溶性成份呈褐色糖浆状,亦有较广的抗菌谱。在国内已报道的抗真菌农用抗生素中,尚没有类似抗菌谱和类似理化性质的抗生素,很可能是一种多组份、新结构农用抗生素,具有广阔的应用前景。但是LA5菌株的发酵效价低,产素性能不稳定,不能满足工业化生产要求。因此,有必要对其进行诱变育种,选育出产素性状优良的突变菌株,为这种广谱抗真菌抗生素的工业化生产奠定基础。 本项研究在进行LA5菌株摇瓶发酵生物学特性研究,明确其抗生素产生条件的基础上,对该菌株进行了紫外线、微波辐射、亚硝基胍等诱变处理研究,分析了各种诱变因子对LA5菌株的诱变效应,明确了最佳诱变剂的种类、最佳诱变剂量和最佳诱变处理时间,并以紫外线为诱变剂对LA5菌株进行了3轮诱变选育,其主要研究结果如下: 1.发酵生物学特性研究结果表明:LA5菌株最适产孢培养基为PDA,在马铃薯——葡萄糖培养液中,菌丝最大生长量在发酵72h,发酵pH值呈先降后升再降趋势,产抗生素高峰在发酵108h,此时pH值为pH7.11,在250ml三角瓶中发酵培养液的最适装液量为50ml,最佳接菌量为1%,发酵周期为108h。 2.16SrDNA序列分析结果表明,LA5菌株与链霉菌属的序列一致性达98%-99.59%,说明LA5菌株属于链霉菌属(Streptomyces sp.)。 3.通过对所使用的各种诱变剂诱变效应的分析,在这三种诱变剂中,亚硝基胍(NTG)的诱变效应强于紫外线和微波的诱变效应,以微波诱变效应最弱。初步明确了LA5菌株诱变处理的最佳诱变剂为紫外线和亚硝基胍,紫外线的最适剂量为2个15W紫外灯、25cm照射距离下的照射时间为80秒,NTG的最佳处理剂量为2-3mg/ml。 4.通过对第一次诱变处理的LA5菌株进行初筛和摇瓶发酵复筛,获得了6株优良菌株80s-7、W433、NTG317、120s-42、NTG338和NTG210,其抑菌效果分别比