促性腺激素释放激素受体(Gn RHR)是G蛋白偶联受体家族的成员,其特征是有一个七次跨膜螺旋结构,它在垂体促性腺激素细胞以及乳腺,卵巢和前列腺等的表面表达。促性腺激素释放激素(Gn RH)与其结合后,该受体与第二信使G蛋白结合,受体的激活最终导致促性腺促黄体生成激素和促卵泡激素的释放。此受体结构的研究可为突破该受体的结构解析瓶颈做铺垫,了解其具体下游作用机制做铺垫,以该受体为靶标的药物开发提供一定的理论基础,同时当此受体作为一种药物靶标时,为前列腺癌、子宫内膜异位症、青春期早熟等相关疾病的治疗提供新的思路与策略。本课题欲对Gn RHR进行表达纯化与功能性研究。针对受体蛋白目的基因进行克隆设计和克隆优化,选择不同框架构建分子克隆,并对目的蛋白进行表达纯化实验检测其蛋白表达情况。然后进行功能性研究实验,针对基因质粒进行分子突变,欲构建成对配体响应性良好的蛋白受体质粒,通过报告基因实验检验其活力。若检验受体蛋白性质良好,热稳定性高、活力性强、单一构象等,再进行蛋白表达纯化实验检测其表达情况。课题针对目的基因设计了几个框架,完成了p Fast Bac-HA-Bril-h Gn RHR-tev-OMBP-MBP-H8、pc DNA3-HA-Flag-H10-tev-Bril-h Gn RHR、p Fast Bac-HAh Gn RHR-tev-OMBP-MBP质粒的构建。验证了受体蛋白的下游通路为NFAT,且发现了delta K191、(S186G,delta K191)、(L112F/Q208E/L300V/D302E,delta K191)、(delta K191,F130W)、(delta K191,F272Y)、(delta K191,F130W,F272Y)、P303A突变下的蛋白受体对配体的响应性增强。蛋白的表达纯结果不大理想,蛋白大量聚集性质不好产量偏低,故待未来进一步摸索探究,找出更适合的框架更有利的突变,使其产量更高、性质更稳定。