论文部分内容阅读
目的:中药博落回(Macleaya cordata)是罂粟科植物博落回(Macleaya cordata(Willd.)R.Brown)和小果博落回(Macleayamicrocarpa(Maxim)Fedde)的全草或根。其主要成分为血根碱和白屈菜红碱。近几年来对博落回的研究发现,其生物碱成分具有抗肿瘤的作用。根据课题组前期进行的细胞抗肿瘤药效筛选实验发现,博落回有效成分血根碱对小鼠结肠癌细胞增殖的抑制较强。因此,本实验以小鼠结肠癌为研究对象,从抑制血管生成方面研究血根碱的抗肿瘤作用及其作用机制,为中药博落回或者血根碱的开发和临床应用提供理论依据。方法与结果:1.体外细胞实验运用MTT法检测作用时间为12h、24h、36h时,博落回血根碱对体外培养的小鼠结肠癌细胞CT26.WT和人脐静脉血管内皮细胞HUVECs的抑制率,并求得血根碱对两种细胞株的半数抑制浓度IC50,考察血根碱对两细胞增殖的抑制作用,结果发现血根碱对小鼠结肠癌细胞CT26.WT和人脐静脉血管内皮细胞的增殖具有明显的抑制作用,其 IC50在 1.08~1.30 μ mol/L 之间。使用化学试剂氯化钴建立低氧模型。运用MTT法研究不同浓度的氯化钴在不同时间点对CT26.WT和HUVECs的作用,考察CT26.WT细胞和HUVECs细胞低氧模型的氯化钴最佳浓度和作用时间。实验结果发现,CT26.WT细胞低氧模型的氯化钴最佳浓度为100 μmol/L,作用时间为6h;HUVECs细胞低氧模型的氯化钴最佳浓度为150 μmol/L,作用时间为4h。运用MTT法检测12h、24h、36h博落回血根碱对低氧条件下CT26.WT细胞和HUVECs细胞的抑制率,实验结果发现血根碱对低氧条件下两细胞增殖的抑制作用依然较明显。使用划痕试验法考察血根碱对低氧条件下CT26.WT细胞和HUVECs细胞迁移的作用研究。实验结果发现血根碱能够阻止两细胞的迁移。2.体内动物实验采用小鼠腋下注射CT26.WT细胞建立小鼠移植瘤模型,以抑瘤率和相对肿瘤体积为指标考察血根碱对荷瘤小鼠的体内抗肿瘤作用,结果显示血根碱对CT26.WT荷瘤小鼠的生长具有明显的抑制作用。抑瘤率结果显示血根碱5mg/kg SA组、10mg/kg SA组、20mg/kg SA 组、40mmg/kg SA 组小鼠的抑瘤率分别为 19.11%、19.96%、36.76%、49.37%。运用免疫组化法检测肿瘤组织中VEGF和CD31的表达。实验结果显示血根碱药物组的肿瘤组织中VEGF和CD31表达均较低,且呈正相关。运用Western blotting法检测肿瘤组织中HIF-1通路上PI3K、AKT、HIF-1 α、VEGF蛋白表达。实验结果提示,血根碱抑制血管生成的作用可能与HIF-1通路有关。结论:结合体内和体外实验可知,博落回有效成分血根碱具有抗肿瘤活性。血根碱可通过抑制血管生成发挥其抗肿瘤作用。但其抑制血管生成的作用与HIF-1信号通路有关。