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为阐明辅助性T(Th)细胞极化群体(Th1/Th2/Th3)在乙型肝炎病毒(HBV)慢性感染中的作用,本文第一部分采用流式细胞分析(FCM),对慢性HBV感染者及对照组外周血CD4+T细胞内IFN-γ、IL-4及TGF-β的表达进行分析。结果显示在正常对照组,Th1/Th2/Th3分别占CD4~+T细胞的2.3%~18.6%,0.9%~9.2%和0.7%~7.1%。在慢性HBV感染者外周血单个CD4+T细胞中,以Th0细胞居多;而Th1细胞则随着肝脏炎症活动的加剧而明显增多,在炎症活动明显的慢性乙型肝炎(CHB),其Th1百分数明显高于炎症活动呈静止状态的CHB;Th2细胞在慢性HBV感染的不同阶段则较为恒定(P>0.05),但明显高于对照组(P<0.05)。Th3细胞的百分数则随着肝组织炎症活动的加剧,其比例也明显减少(P<0.05),在无症状携带者(AsC)组,Th3细胞的百分数远高于CHB组及对照组(P<0.05)。Th3细胞重叠于Th2细胞之中。提示Th1细胞类因子与炎症活动呈正相关,Th2细胞可能与HBV感染的慢性化相关联。而Th3细胞与Th2细胞协同发挥负性免疫调节作用,并可能与慢性HBV感染的免疫耐受状态相关联。 同时第二部分采用RT-PCR的方法,分析慢性HBV感染者PBMC内IFN-γ、IL-4 mRNA的表达情况。在静息期,无明显的IL-4及IFN-γ mRNA的表达;活动期IFN-γ mRNA的表达率明显高于恢复期(100%:50%;p<0.05);恢复期IL-4 mRNA的表达率明显高于活动期(87%:13%;p<0.05)。结果提示在CHB,IFN-γ作为免疫调节以及IL-4作为免疫抑制性细胞因子的可能性,Th1/Th2细胞因子可能分别与肝组织炎症呈正负相关。 为了解Th细胞极化群体在CHB肝组织中的分布情况,本文第三部分采用有限稀释法,建立了CHB患者外周血及肝组织HBcAg特异性Th细胞克隆,并对所获得细胞克隆进行分析。发现自肝组织分离的HBcAg特异性T细胞克隆,92.5%为CD4~+表型,以Th1为主;而来源于外周血的T细胞克隆主要以Th0为主,并与HBeAg是否阳性无关。仅15%(6/40)的T细胞克隆呈现明显的HBcAg特异性淋巴细胞增殖反应。在肝组织及外周血占主导地位的Th细胞极化群的不同,较高比例的Th1细胞在肝组织炎症局部的聚集,提示在HBV的免疫发病机理中,Thl细胞可能起重要作用。 为阐明自然杀伤性(N卜T细胞在HBV慢性感染中的作用,本文第四部分对慢性 HBV感染者 PBMC,用重组人几上八L上 诱导 14天,采用 FCM分析CD3+CD56+T eK*)细胞的百分含量,并采用’℃r释放试验,对诱导后的细胞样品进行细胞毒性试验。CD4+NK-T细胞的含量在正常对照组、CHB组和 AsC组分别为 18二e4.20,6.9512.85和 1.50if.30,CDS”NK-T细胞的比例(%)在正常对照组、CHB组及 ASC组分别为 2.70土 1.10,2.Zbel.40和3.1010.70。AsC组的细胞毒性明显低于正常对照组和 CHB组(P(0刀5);阻断实验证实CD4+NK-T细胞为具有细胞毒性的效应细胞。提示慢性HBV感染者细胞免疫功能低下,可能与其CD4+NK-T细胞数量的不足相关。