A型肉毒素对L5前根切断大鼠模型中辣椒素受体表达的影响

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[目的]   评价A型肉毒毒素在L5前根切断大鼠疼痛模型中的作用,并观察该模型中腰段脊髓背角和背根神经节上辣椒素受体表达的变化,探讨A型肉毒毒素在该疼痛模型中缓解热痛敏及机械痛敏可能的机制,为其临床治疗神经病理性疼痛以求提供科学的理论依据。   [方法]   1.通过建立L5前根切断的大鼠疼痛模型,在术后不同的时间点(术后3天、14天),通过皮下给药(A型肉毒毒素或辣椒素受体拮抗剂或生理盐水),在给药前后做行为学测试,跟正常对照组及假手术组对比,观察大鼠机械痛敏及热痛敏的变化。   2.通过建立成功的L5前根切断的大鼠疼痛模型,同时设假手术组(仅暴露左侧脊髓,不做前根切断)及对照组,在术后不同的时间点(术后1天、3天、7天、14天、21天),行免疫荧光染色及western blotting,观察腰段脊髓背角和背根神经节上辣椒素受体的表达。   3.比较在L5前根切断的大鼠模型及假手术组模型上,在术后不同的时间点(术后3、14天),给予皮下注射A型肉毒毒素或辣椒素受体拮抗剂,在给药后第3、7、14天行动物取材做免疫荧光染色及western blotting,观察腰段脊髓背角及背根神经节辣椒素受体表达的变化。   [结果]   在皮下给予A型肉毒毒素,在术后3天、14天给药,均有明显的改善机械痛敏及热痛敏的作用,以给药后2周时镇痛效果最显著;给药疼痛缓解程度在第7天起同侧与对侧比较差异有统计学意义。免疫荧光染色结果:无药物干预下,VRT组在术后7天起与假手术组及对照组比较双侧L4及L5的背根神经节的TRPV1表达明显升高。术后21天升高最明显。手术侧TRPV1升高更明显。相应节段的脊髓背角上TRPV1表达也呈增加趋势,跟对侧对比差异有统计学意义。药物干预组:3d模型组给BTX-A后,同侧背根神经节及脊髓背角的TRPV1表达在给药后7天起明显下降,对侧表达也有下降,与假手术和对照组相比差异有统计学意义;14d组变化趋势跟3d组一致,但下降幅度较低;高剂量BTX-A(20u/kg)时TRPV1减少更具有统计学意义(P<0.01)。TRPV1受体拮抗剂SB366791能降低其表达,但需要连续用药。western blotting结果显示TRPV1变化趋势与免疫荧光染色受体表达的变化一致。   [结论]   皮下注射A型肉毒毒素,能改善L5前根切断模型的大鼠的机械痛敏及热痛敏;在该病理性疼痛模型中,在背根神经节及相应节段的脊髓背角TRPV1的表达呈升高趋势;在术后不同时间皮下注射A型肉毒毒素均能够降低双侧背根神经节及脊髓背角的TRPV1的表达,且呈剂量相关性。Western blotting的结果与免疫荧光观察到的TRPV1表达呈同向变化。根据实验结果推断A型肉毒毒素能缓解神经病理性疼痛,其作用部分与抑制TRPV1表达有关。
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