论文部分内容阅读
引言超广谱β内酰胺酶可以水解广谱的头孢菌素(比如头孢他啶和头孢)以及单环β-内酰胺类,能被β内酰胺酶抑制剂抑制。大部分的超广谱β内酰胺酶来源于广谱β内酰胺酶TEM-1,TEM-2,SHV-1,系广谱β内酰胺酶的氨基酸突变所致。1983年在德国首次报道了超广谱β内酰胺酶(SHV-2)。迄今为止已发现多种超广谱β内酰胺酶,根据编码基因的同源性,有TEM, SHV, CTX-M, OXA及其他型。1989年首次报道TEM型超广谱β内酰胺酶(TEM-3)。上个世纪90年代,在临床上青霉素与β内酰胺酶抑制剂联合使用,随后出现了对酶抑制剂耐药的TEM酶,这些酶被命名为IRT. (inhibitor-resistant TEM). 90年代中期又出现了TEM酶的新亚型,它包括IRT和ESBL的突变位点,这种新β内酰胺酶,被称为复合突变TEM酶。(complex mutant TEM)。产超广谱β内酰胺酶菌株的检出率逐年增高,产超广谱β内酰胺酶菌株呈现多重耐药,其耐药率显著高于非产超广谱β内酰胺酶菌株。所以对产超广谱β内酰胺酶菌株的监测十分重要。目的1.了解临床分离大肠埃希菌中产超广谱β内酰胺酶( ESBLs)菌株的发生率及耐药性。.2.了解临床分离产超广谱β内酰胺酶( ESBLs)菌株中TEM型基因的发生率和基因型别,以期发现新型的TEM型β内酰胺酶。3.了解产TEM型β内酰胺酶菌株的分子流行病学特征。材料与方法菌株来源收集的安徽医科大学第一附属医院2005年临床分离的大肠埃希菌90株。方法经CLSI表型确证试验检测产ESBLs菌株。琼脂稀释法测定产ESBLs菌株及非产ESBLs菌株对抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC)。编码框外设计引物,在两条引物的5`端分别加EcoRΙ和BamHΙ两个酶切位点, PCR检测产ESBLs菌株中TEMβ内酰胺酶并测序确定其基因型别。使用ERIC-PCR检测产TEMβ内酰胺酶菌株的同源性。将TEM全编码基因克隆入表达载体pHSG398,转化于感受态细胞大肠埃希菌JM109中,琼脂稀释法测定克隆菌株对β内酰胺类抗菌药物的MIC值。结果90株临床分离的大肠埃希菌中有48株产超广谱β内酰胺酶,ESBLs的检出率为53.3%.(48/90);产超广谱β内酰胺酶菌株中32株被证实产TEM型β-内酰胺酶;占所有分离菌株的35.5% (32/90),占产ESBLs菌株的66.6 % (32/48);32株TEM型阳性菌株中,31株产生TEM-1,1株产生TEM-166(TEM-166的GenBank注册号:FJ197316)。TEM-166与TEM-1相比有一个氨基酸差异Arg120→Gly。产TEM-1和产TEM-166菌株均对哌拉西林耐药,但对哌拉西林/克拉维酸、头孢噻肟、头孢他啶和亚胺培南表现为敏感。TEM阳性菌株32株,ERIC-PCR图谱可以分为24个不同谱型。其中2种谱型均含3株细菌,4种谱型均含有2株细菌,其余一种谱型含1株细菌。结论1.产ESBLs菌株较非产ESBLs菌株的耐药率高,且呈多重耐药,β-内酰胺酶抑制剂可显著其降低其耐药率。2.产ESBLs菌株中TEM型β内酰胺酶的基因型别主要为TEM-1,并发现一种新亚型TEM-166。3. TEM-166与TEM-1的表型相同,为广谱的TEM型β内酰胺酶。(TEM-166的GenBank注册号:FJ197316)