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目的: 探讨在复合培养的条件下,通过调节角质形成细胞中的Notch信号,了解其对成纤维细胞增殖能力、以及分泌细胞外基质和细胞因子的影响。 方法: 在诱导角质形成细胞终末分化的过程中,用Jagged-1或者γ-分泌酶抑制剂DAPT进行预处理,调控角质形成细胞中的Notch信号,然后通过血清刺刺激和提升至气液交界面使其达到复层生长和终末分化,后与成纤维细胞共培养。首先,在复合培养前,即诱导角质形成细胞分化的过程中,通过real-timePCR检测Notch信号受体Notc-1、相应配体Jagged-1、下游调控基因p21和p63的表达,明确Notch信号是否活化。其次,通过将调节Notch信号后的角质形成细胞与成纤维细胞复合培养,细胞计数检测成纤维细胞增殖能力、real-timePCR和ELISA分别从mRNA和蛋白质水平检测成纤维细胞合成和分泌的Collagen-1、Fibronectin、KGF和细胞因子的表达。 结果: 用Fc段和DMSO分别对角质形成细胞进行预处理,检测其Notch信号下游分子p21和p63的表达,与Blank组相比,均未见明显异常(P>0.05)。而用Jagged-1对角质形成细胞进行预处理,检测p21和p63、以及Notch信号受体Notch-1和相应配体Jagged-1在角质形成细胞中的表达,均发现Notch信号明显活化。用DAPT对角质形成细胞进行预处理,结果表明:相对于Blank组,DAPT组角质形成细胞中Notch信号受到抑制。分别对复合培养后第1天、第3天和第5天的成纤维细胞进行检测,发现Notch信号活化的Jagged-1组的角质形成细胞能够明显促进与其共培养的成纤维细胞的增殖、分泌Collagen-1、Fibronectin、KGF、以及TGF-β1的合成(P<0.05)。而在Notch信号被抑制的DAPT组,成纤维细胞的增殖能力与Blank组对比虽无明显差别(P>0.05),但其分泌Collagen-1、Fibronectin、KGF和TGF-β1的能力却明显受到抑制(P<0.05)。 结论: Notch信号活化可能参与瘢痕的增生过程,阻断Notch信号后的角质形成细胞与成纤维细胞共培养,能够明显抑制成纤维细胞合成和分泌Collagen-1、Fibronectin、KGF和TGF-β1的能力,从而抑制瘢痕的增生。成纤维细胞合成的KGF和TGF-β1可能参与了该过程的调节。