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目的:胰腺癌(pancreatic carcinoma,PC)是一种早期诊断困难、恶性程度极高、治疗困难、预后差的消化道肿瘤。现有的肿瘤标志物:糖链抗原19-9(CA19-9)、糖链抗原242(CA242)、糖链抗原50(CA50)等,在胰腺癌的诊断中普遍都存在着敏感性低、特异性差、假阳性率高等缺陷。因此临床上需寻找新的、特异性更高的胰腺癌相关肿瘤标记物来提高胰腺癌的早期诊断。本研究利用前期实验中“同位素标记相对和绝对定量(i TRAQ)技术结合纳升级反相液相色谱-串联质谱(nano RPLC-MS/MS)”,筛选出了胰腺癌、胰腺良性肿瘤以及健康对照组在外周血清中差异表达的蛋白,并鉴定出了诊断胰腺癌的候选血清标记物:胰岛素样生长因子结合蛋白-2(IGFBP-2)、腱生蛋白-X(Tenascin-X)、α-HS-糖蛋白(AHSR)、聚免疫球蛋白受体(PIGR)、载脂蛋白A-Ⅱ(Apo A-Ⅱ)、血清淀粉样蛋A-4(SSA-4)、组织蛋白酶D(Cathepsin D)这7种差异性蛋白。通过比较分析从中筛选出胰岛素样生长因子结合蛋白-2(IGFBP-2),从基因和蛋白质水平分析其在胰腺癌组织、胰腺癌旁组织、胰腺良性病变及正常胰腺中表达的特点,并探讨该蛋白与胰腺癌的临床病理因素的相关性和在胰腺癌的诊断、治疗中存在的潜在价值。方法:1、实验研究对象分为三个组,即胰腺癌组、胰腺良性病变组(包括胰管结石、胰腺假性囊肿、胰岛素瘤手术时切除的胰腺标本)各8例及正常胰腺组8例(胰腺外伤行胰腺部分切除2例、壶腹部肿瘤、胆总管下段肿瘤行胰十二指肠切除时所切除标本中的正常胰腺组织6例)。标本采集均经伦理委员会批准授权,患方知情同意后,术中采集切除的胰腺组织,标本采集后均放入预分装含有RNA保存液的冻存管中,并立即放入-80℃冰箱冻存备用。2、胰腺组织中IGFBP-2 m RNA的测定:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法,以β-actin为内参,检测标本中胰岛素样生长因子结合蛋白-2(IGFBP-2)基因m RNA的相对表达量。其中IGFBP-2 5’Primer:GTTGCAGACAATGGCGATGAC,IGFBP-2 5’Reverser:GTTCCTGTTGGCAGGGAGTC;β-actin 5’Primer:CACCGAGC ATGGCTATAGGT,β-actin 5’Reverser:AACCGCTCGTTGCCGATG。根据样本标准曲线和PCR反应Ct值,用Bio-Rad IQ5软件分析,利用相对定量的2-△△Ct分析法来进行IGFBP-2 m RNA表达量的检测。3、运用En Vision免疫组织化学法检测胰岛素样生长因子结合蛋白-2(IGFBP-2)的表达。免疫组化的标本来源于泸州医学院附属医院肝胆外科2009年1月至2014年9月期间手术切除且均经病理学证实的胰腺癌标本40例,患者术前均未进行放、化疗治疗,并获得40例对应胰腺癌、癌旁组织的石蜡标本及完整病历资料,以正常胰腺作为对照。根据临床病历资料分别按照胰腺癌患者的年龄、性别、肿瘤分化程度、肿瘤的大小、合并淋巴结转移与否、TNM分期等统计IGFBP-2阳性的表达情况。此外还根据这40例胰腺癌患者的临床病历资料,统计了术前血清CA19-9>37u/ml时,IGFBP-2阳性表达的情况。所有统计学数据均用SPSS17.0软件进行统计学分析,分析IGFBP-2在胰腺癌组织中的阳性表达与临床病理因素的关系,采用卡方检验或秩和检验,两者相关性采用Spearman相关性分析,以P<0.05认为差异具有统计学意义。结果:1、RT-PCR结果示:IGFBP-2m RNA基因的相对表达量在胰腺癌组中(4.18±0.18)明显高于胰腺良性肿瘤组(2.10±0.18)及正常胰腺组(1.0±0.08)。2、免疫组化结果示:IGFBP-2表达部位在胰腺癌组织的胞浆中且胰腺癌组织中IGFBP-2的阳性表达率92.5%,高于癌旁组织40%,而在正常胰腺组织中不表达,胰腺癌和癌旁组织相比(X2=30.386,p=0.004)差异具有统计学意义。3、IGFBP-2阳性表达与胰腺癌临床病理的关系:胰腺癌组织中IGFBP-2的表达与胰腺癌组织的分化程度有关,中低分化胰腺癌组明显高于高分化胰腺癌组,两组比较差异有统计学意义(X2=10.321,p=0.001);并且与淋巴结的转移相关,淋巴结转移组高于不转移组,两组比较差异有统计学意义(X2=26.694,p=0.000);与胰腺癌TNM分期相关,分期越晚IGFBP-2的表达量越高,差异有统计学意义(秩和检验,p=0.002);而与年龄、性别及肿瘤大小无关。4、术前血清CA19-9水平与IGFBP-2的阳性表达存在相关性,即术前血清CA19-9>37u/ml的胰腺癌中IGFBP-2的阳性表达明显高于CA19-9≤37u/ml组,差异具有统计学意义。(X2=6.323,p=0.012)。结论:1、胰岛素样生长因子结合蛋白-2(IGFBP-2)m RNA在胰腺癌组织中存在表达,且明显高于胰腺良性肿瘤组织及正常胰腺组织,差异具有统计学意义。2、胰岛素样生长因子结合蛋白-2(IGFBP-2)与临床病理特征间存在相关性,即分化程度愈差,TNM分期越晚,出现淋巴结转移者,IGFBP-2的表达愈高,而与年龄、性别及肿瘤大小无关。3、IGFBP-2在胰腺癌的诊断中有一定的价值,当与胰腺癌的肿瘤标志物(如CA19-9)联合检测时,可能为提高胰腺癌的诊断率提供重要的信息。