目的：（1）选择微创方法自早孕妇女宫颈管内获取脱落滋养细胞，观察滋养细胞的数量。（2）应用差速贴壁法培养获取的脱落细胞标本，探讨宫颈管内的脱落滋养细胞在体外培养的可行性。（3）联合差速贴壁法和免疫磁珠分选细胞法扩增并纯化胎儿滋养细胞，初步探索此方法纯化富集胚胎滋养细胞的效率。（4）探讨宫颈管内获取脱落滋养细胞在早孕期无创性产前诊断中应用的可行性。方法：（1）选择2010年10月-2011年5月在安徽医科大学第一附属医院产科门诊就诊的有停经史，尿妊娠实验阳性，妇科检查及超声证实早孕并自愿要求终止妊娠的或早孕期胚胎停止发育的共170例孕妇（孕6-10周）作为研究对象（包括预实验30例，正常早孕要求终止妊娠的120例及早孕胚胎停止发育的20例）。统计实验对象的孕周，根据末次月经法和超声法联合推算孕龄。超声下测得胚胎长度时，孕周=胚胎长（cm）+6.5；或按照妊娠囊最大内径推算：孕周=妊娠囊最大内径（cm）+3；早孕胚停标本则为B超提示胚胎停止发育（无心管搏动，不能见到胚芽等）。知情同意后，在为其行人工负压吸宫术前用特殊细胞刷无创获取其宫颈管脱落细胞。人工流产过程中无菌获取实验对象的绒毛组织行常规绒毛细胞培养。将收集到脱落细胞标本的细胞刷置于无菌生理盐水中充分涮洗以获取宫颈管内的脱落细胞标本。标本中混有大量的宫颈黏液，加入适量胶原酶消化获取标本中的宫颈黏液。取适量经过胶原酶消化处理的细胞标本行HE染色鉴定宫颈管内滋养细胞存在情况。（2）应用差速贴壁培养法培养上述经过处理的取自宫颈管的细胞标本，初步提高滋养细胞的比率。经过2-3天的培养，使标本中细胞增殖。将经差速贴壁培养及短期细胞增殖培养成功的正常早孕组67例标本取适量细胞悬液行HE染色鉴定标本中滋养细胞存在情况及比率。（3）选取阳性细胞比率及细胞量较多的15例标本（滋养细胞比率≥30%）行抗HLA-G免疫磁珠法阳性分选（MACS）胚胎滋养细胞,比较MACS分选前后滋养细胞的比率。结果:1.预实验结果（1）预实验中HE染色30例正常早孕组获取的胚胎脱落滋养细胞样本，19例标本中见滋养细胞，标本阳性率63.3%。镜下平均可见滋养细胞数为7个。（2）19例阳性标本用不同的方法培养，培养成功15例（差速贴壁组7例，常规对照组8例），再次行HE染色8例标本见滋养细胞（差速贴壁组6例，常规对照组2例），卡方检验比较两种培养方法的滋养细胞培养成功率存在统计学差异，2=5.53，p<0.05。差速贴壁组标本镜下可见滋养细胞数平均32.4个，平均滋养细胞比率为21.5%。滋养细胞平均数是差速贴壁培养前的4.6倍。2，正式实验结果（1）120例正常早孕标本行HE染色后，81（67.5%）例标本镜下见滋养细胞，39（32.5%）例标本阴性；卡方检验比较各孕周的阳性标本率（滋养细胞≥1个/片），2=1.68p=0.641>0.05,差异无统计学意义。方差分析比较各孕周阳性标本中的实际滋养细胞数，F=4.636，p=0.005<0.05，各孕周所收集的阳性标本的实际滋养细胞数差异有统计学意义，孕6-10周随着孕周增加标本中的滋养细胞数增多。HE染色20例早孕胚停组获取的宫颈管脱落细胞样本，10例标本中见滋养细胞，标本阳性率50.0%，随着孕周增加标本中平均滋养细胞数增多。方差分析比较两组阳性标本中不同孕周的滋养细胞数，发现正常早孕组和早孕胚停组各孕周所收集的阳性标本的滋养细胞数差异无统计学意义。（2）正常早孕组中81例阳性标本经差速贴壁培养及短期细胞增殖培养后，67（82.7%）例培养成功。卡方检验比较各孕周阳性标本的培养成功率，2=0.291，p=0.962>0.05,差异无统计学意义，说明各孕周标本在培养成功率上无差别。在培养成功的标本中，卡方检验各孕周差速贴壁所得的阳性标本率2=19.009，p=0.000<0.005,差异具有统计学意义，随着孕周增加，差速贴壁培养获得的滋养细胞数比率在下降。早孕胚停组的10例阳性标本行差速贴壁培养后，4例培养成功，再次行HE染色无一例标本中见滋养细胞。（3）取差速贴壁后67例阳性标本的适量细胞悬液行HE染色，36例标本存在胚胎滋养细胞（标本阳性率53.7%，滋养细胞数≥1个/片）。方差分析比较差速贴壁后各孕周阳性标本中平均滋养细胞数,F=2.139,p=0.115>0.05,差异无统计学意义；而方差分析比较各孕周差速贴壁后阳性标本中的滋养细胞比率，F=4.374，p=0.011<0.05，差异有统计学意义。（4）选取差速贴壁培养后HE染色阳性的15例标本（滋养细胞比率≥15%）行免疫磁珠分选（MACS）进一步纯化细胞，将纯化后的细胞行HE染色，鉴定标本中滋养细胞的比率，单因素方差分析比较MACS分选前后平均滋养细胞的比率差异具有统计学意义，F=6.061，p=0.02<0.05。结论：（1）早期妊娠妇女宫颈管内存在胚胎来源的滋养细胞，且滋养细胞在孕6-10周稳定存在，不受胚胎发育质量的影响。（2）正常早期妊娠妇女较早孕胚停妇女宫颈管内脱落滋养细胞培养成功率更高。（3）宫颈管内胚胎脱落滋养细胞标本经短期培养可提高滋养细胞数量及比率，但同时会降低阳性标本的数量。（4）联合细胞差速贴壁法与免疫磁珠分选细胞法富集分选滋养细胞能提高细胞标本中滋养细胞率，从而有应用于早期微创的快速产前诊断的可能。（5）运用免疫磁珠法分选宫颈管内胚胎滋养细胞是可行的，但仍需特异性较高单克隆抗体提高分选效率。