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脑血管疾病是临床常见病、多发病，是三大致死疾病之一，严重危害人类的健康和生命。随着人口增加及老龄化程度加重，其发病率、病死率及致残率呈逐年上升趋势。其中缺血性脑血管病占很大的比例，脑缺血治疗的关键是迅速恢复脑血液灌注，保持血流通畅。但恢复血流灌注后脑损伤仍可能进一步加重，即存在脑缺血再灌注损伤。缺血/再灌注损伤(ischemia reperfusion injury,IRI)是指遭受一定时间缺血的组织恢复血供后,组织损伤程度加重的病理现象。脑缺血再灌注损伤危害极大，其损伤机制涉及众多复杂环节和因素，是多年来科学家一直关注的重点。随着对脑缺血损伤机制研究的日益深入,细胞凋亡在脑缺血再灌注中的作用引起关注。研究表明,神经细胞凋亡是缺血性脑损伤后细胞死亡的重要形式。细胞凋亡受多种相关基因及其蛋白调控，其中天冬半胱氨酸蛋白酶(Caspase)与细胞凋亡关系最密切。黄芪注射液为临床治疗缺血再灌注性脑血管病的常用药物，可抑制细胞凋亡的发生，但具体通过何种信号转导通路抑制细胞凋亡，其机制尚未完全阐明。本课题组前期实验证实，黄芪注射液可抑制体外培养的缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元凋亡，并证实黄芪注射液通过抑制JNK通路发挥该作用。但是，在体内情况下，黄芪注射液是否能够抑制大鼠脑缺血再灌注后海马神经元凋亡，是否能抑制JNK通路，尚属未知。本课题通过观察黄芪注射液对大鼠脑缺血再灌注后海马神经元Caspase-3表达的影响，探讨黄芪注射液对大鼠脑缺血再灌注后海马神经元凋亡的抑制作用；并分别应用JNK的激动剂和抑制剂，探讨黄芪注射液的抗凋亡作用是否通过抑制JNK通路来实现。第一部分黄芪注射液对大鼠脑缺血再灌注后海马CA1区神经元形态学的影响。目的:观察黄芪注射液对大鼠脑缺血再灌注后海马CA1区神经元形态学的影响。方法:选取成年雄性SD大鼠，随机分为4组：假手术组、模型组(脑缺血再灌注组)、黄芪注射液组、黄芪注射液溶剂对照组。采用四血管阻断法制备大鼠脑缺血再灌注模型，黄芪注射液组和黄芪注射溶剂对照组在缺血前30min分别给予黄芪注射液和无菌去离子水(6ml/kg)，再灌注24小时（hours,h）后采用HE及TUNEL染色观察大鼠海马CA1区神经元病理学变化。结果：HE染色：模型组大鼠海马神经出现明显的病理变化，海马神经细胞排列欠规则，界限不清楚，正常细胞结构消失，胞核区域浓染，出现凝固性坏死，细胞脱失明显，与假手术组相比大鼠海马CA1区神经元数目明显减少(P<0.05)；与模型组相比，黄芪注射液组大鼠海马CA1区神经元数目明显增多(P<0.05)，而溶剂对照组与模型组相比则无明显变化(P>0.05)。TUNEL染色法实验结果显示：与假手术组相比，模型组凋亡细胞显著增多(P<0.05)；与模型组相比，黄芪注射液组的凋亡细胞显著减少(P<0.05)，而黄芪注射液溶剂对照组与之相比则无统计学差异(P>0.05)。小结：黄芪注射液可减少大鼠脑缺血再灌注后海马CA1区神经元的丢失，减轻细胞凋亡。第二部分黄芪注射液对大鼠脑缺血再灌注后海马神经元Caspase-3表达的影响目的：观察黄芪注射液对大鼠脑缺血再灌注后海马神经元凋亡相关蛋白Caspase-3及其mRNA表达的影响。方法:选用成年雄性SD大鼠随机分为4组：假手术组、模型组(脑缺血再灌注)、黄芪注射液组和黄芪注射液溶剂对照组。造模方法同第一部分，除假手术组外，各组均进行脑缺血0.5h。分别于再灌注0h、0.5h、2h、6h、24h、72h和120h后采用组织免疫化学法、 Western blot法检测海马神经元Caspase-3蛋白的表达， Real-Time PCR法检测海马神经元Caspase-3mRNA的表达。结果：组织免疫化学结果显示：假手术组大鼠海马CA1区神经元核规整，有少许胞浆黄染；模型组大鼠海马CA1区神经元核皱缩，染色质边集，大量胞浆黄染，胞核内有少许黄色颗粒，除0h，0.5h外，海马CA1区神经元Caspase-3蛋白阳性表达在各个时间点均比假手术组明显增多(P<0.05)；黄芪注射液溶剂对照组海马CA1区神经元形态变化和海马CA1区神经元Caspase-3阳性表达与模型组一致(P>0.05)；黄芪注射液组大鼠海马CA1区神经细胞有轻微核皱缩，可见部分神经元胞浆黄染，除0h,0.5h时间点之外，海马神经元Caspase-3蛋白阳性表达在相对应时间点均比模型组明显减低(P<0.05)。随着再灌注时间的延长，模型组、黄芪注射液溶剂对照组及黄芪注射液组均可见到阳性神经元胞质中黄色颗粒逐渐增多，于24h达到高峰。Western blot和Real-Time PCR结果显示:与假手术组相比，除0h和0.5h外，模型组Caspase-3蛋白及mRNA表达明显升高(P<0.05)，再灌注24h后Caspase-3蛋白及mRNA表达达到高峰。与模型组相比，黄芪注射液组除0h和0.5h外的各个时间点Caspase-3蛋白及mRNA表达均明显降低(P<0.05)；而黄芪注射液溶剂对照组Caspase-3蛋白及mRNA表达与模型组相比则无显著变化(P>0.05)。小结：黄芪注射液可抑制大鼠脑缺血再灌注后海马神经元Caspase-3蛋白及mRNA的表达，从而抑制大鼠脑缺血再灌注引起的海马神经元凋亡。第三部分JNK抑制剂和激动剂对脑缺血再灌注大鼠海马神经元Caspase-3表达的影响目的：观察JNK抑制剂和激动剂对脑缺血再灌注大鼠海马神经元Caspase-3表达的影响。方法：选用成年雄性SD大鼠随机分为7组：假手术组、模型组(脑缺血再灌注)、黄芪注射液溶剂对照组、黄芪注射液组、JNK抑制剂组、JNK激动剂组和DMSO组(药物溶剂对照组)。造模方法同第二部分。再灌注24h后采用细胞免疫化学法、Western blot法和Real-Time PCR法检测海马神经元Caspase-3的表达。结果：组织免疫化学结果显示：假手术组大鼠海马神经元核膜完整，核大而圆，有1-2核仁，有少许细胞胞浆黄染；模型组大鼠海马神经元胞核皱缩，染色质边集，大量细胞胞浆黄染，胞核内有少许黄色颗粒，海马神经细胞Caspase-3蛋白阳性表达比假手术组明显增多(P<0.05)；与模型组相比，黄芪注射液溶剂对照组、DMSO组的Caspase-3蛋白阳性表达无明显变化(P>0.05)，而黄芪注射液组和SP600125组的Caspase-3蛋白阳性表达均明显降低(P<0.05)，但此两组之间无明显差别(P>0.05)，同时JNK激动剂组的Caspase-3蛋白阳性表达则明显增加(P<0.05)。Western blot及Real-TimePCR结果显示:与假手术组相比，模型组Caspase-3蛋白及mRNA表达明显升高(P<0.05)；与模型组相比，黄芪注射液溶剂对照组、DMSO组的Caspase-3蛋白及mRNA表达无明显变化(P>0.05)，而黄芪注射液组、SP600125组的Caspase-3蛋白及mRNA表达明显降低(P<0.05)，但此两组之间无明显差别(P>0.05)，同时JNK激动剂组的Caspase-3蛋白及mRNA表达则明显增加(P<0.05)。小结：黄芪注射液可通过抑制JNK信号通路的激活而减少Caspase-3的表达，从而抑制大鼠脑缺血再灌注后海马神经元的凋亡。结论：1黄芪注射液可减少大鼠脑缺血再灌注后海马CA1区神经元的丢失，减轻细胞凋亡。2黄芪注射液可抑制大鼠脑缺血再灌注后海马神经元JNK信号通路的激活而抑制Caspase-3蛋白及mRNA的表达，从而抑制大鼠脑缺血再灌注引起的海马神经元凋亡。