高效液相色谱技术,又称高压液相色谱,是化学、医药、工业、农学、商检、法检等学科领域中的主要分离分析技术,具有柱效高、灵敏度高、分离效率高、分析速度快、适用范围广、操作方便、重复性好、样品用量低、自动化程度高等优点。中药及中药复方为我国传统医学的瑰宝,具有神奇的疗效,但其成分复杂多样。因高效液相色谱技术具有多种优点,能对中药及中药复方复杂多样的成分进行分离、分析、检验、成分提取等,目前已被广泛应用于中药材及中药复方的分析研究中,为中药的制作、治疗控制、临床应用等提供科学依据。赤芍、牡丹皮为常用的清热凉血中药,其主要活性成分芍药苷、丹皮酚。目前对二者及其活性成分的研究表明,其药理作用广泛,具有保护心、脑血管、神经系统及抗肿瘤、降血压、调节免疫等多种作用,已被用于治疗多种疾病。银屑病为常见的慢性炎症性皮肤病,中医名为“白疕”,其病因不清,发病率高,且顽固难愈、治疗棘手。近现代医家均认为“血热”是银屑病发病的主要原因,临床常应用清血分之热的药物治疗血热型银屑病。多项临床观察中运用中药复方药治疗血热型银屑病均取得较高的疗效,其方剂组成中均含有赤芍、牡丹皮。导师白彦萍教授依据银屑病“血热”病机的自拟清热凉血方(祛银颗粒),方药以清热、凉血、解毒中药为主,组成包括赤芍、牡丹皮等。运用清热凉血方及其加减方药治疗血热型银屑病,其疗效及安全性已通过前期的临床试验及动物模型试验得到证实,且在前期研究中,以清热凉血方浸膏灌胃大鼠制备的药物血清还能抑制银屑病体外HaCaT细胞模型中JNK2MAPK信号通路的活化,从而下调TNF-α和IL-β诱导的HBD-2的表达。目的：本研究以高效液相色谱技术建立清热凉血方浸膏中芍药苷、丹皮酚的含量测定方法,并测定二者在本院药剂科所制备的浸膏中的含量。方法：取样品,加甲醇超声提取,制备供试品溶液；另取芍药苷、丹皮酚对照品,加甲醇配制成混合对照品溶液；并按处方去赤芍、牡丹皮煎煮后制备阴性对照溶液。采用反相高效液相色谱法建立测定供试品中芍药苷、丹皮酚含量的方法。(1)色谱条件选择：查阅文献确定两个成分的检测波长；以0.1%磷酸水溶液-乙腈为流动相按不同时间-比例梯度洗脱进行比较,确定最佳分离条件。(2)标准曲线绘制：以不同体积的混合对照品溶液注入色谱仪,测定两个成分对应的峰面积为纵坐标,对照品的进样量为横坐标,绘制标准曲线,计算回归方程。(3)精密度考察：将同一供试品溶液连续进样6此,测定峰面积,计算RSD值；(4)重复性考察：制备6份供试品溶液,各进样测定峰面积,计算RSD值；(5)稳定性考察：将同一供试品溶液,室温放置,于不同时间进样测定峰面积,计算RSD值；(6)加样回收试验：取已知含量的同一样品,加入混合对照品溶液,测定含量,计算平均回收率及RSD值；(7)含量测定：以上述测定方法,测定清热凉血方浸膏中芍药苷、丹皮酚的含量。结果：芍药苷在25.075～300.90ng范围内线性关系良好,回归方程y=1.4983x+6.3114(r=0.9995),平均加样回收率为99.70%(RSD=2.09%, n=6);丹皮酚在1.407～16.884ng范围内线性关系良好,回归方程y=5.9812x+2.2144(r=1),平均加样回收率为98.30%(RSD=1.76%,n=6)。结论：该测定方法操作快速简便、准确稳定、重复性好,可用于清热凉血方中芍药苷、丹皮酚的含量测定、质量控制。