论文部分内容阅读
目的:对变应性鼻炎(AR)患者和正常人的抗原处理相关转运蛋白(TAP)的TAP1333和TAP1637位点进行基因及等位基因分型,探讨该基因位点多态性与变应性鼻炎遗传易感性之间的关系。方法:①特异性IgE的检测。各抽取AR组和对照组研究对象新鲜血液2ml,离心后吸取上层血清。应用阿罗格AD体外诊断盒对血清进行特异性变应原(9项)的检测。根据试纸显色深浅判定阳性结果的强弱程度,分别以+,++,+++表示。②外周血DNA的提取。各抽取AR组和对照组研究对象新鲜抗凝血液2ml,用淋巴细胞分离液提取白细胞后,应用血液基因组DNA提取试剂盒提取出DNA,-20℃进行保存。应用紫外分光光度计测定DNA样本的纯度和浓度,记录260nm、280nm波长时的OD值。③引物合成。根据TAP1333和TAP1637位点分别设计四条引物,包括一对共同引物和两条特异引物。引物设计参照文献Powis et al.[4]④ARMS-PCR扩增。根据TAP1333和TAP1637位点等位基因型不同分别设计三组引物,每个研究对象需加A、B、C三管含不同引物对的反应体系,其每管的扩增产物代表同一研究对象的DNA在不同引物对作用下延伸的产物。⑤琼脂糖凝胶电泳。将同一样本在不同引物扩增下得到的PCR反应产物混合后进行水平电泳,完毕取出琼脂糖凝胶,紫外分析灯下分析结果。⑥统计学处理应用SPSS11.0统计软件分析,计算TAP基因的等位基因频率、基因型频率分布,分析基因多态性与疾病的相关性,组间比较用χ2检验,P >0.05有统计学意义。结果:1特异性IgE检测结果:特异性变应原分布情况检测结果显示屋尘螨检测阳性率位于首位(86.67%),其次为花粉类和动物上皮。2 DNA浓度及纯度检测结果:65例研究对象外周血DNA稀释后在紫外分光光度计下测定的OD260/OD280比值在1.5~2.0之间。部分样本可能存在RNA或蛋白质污染,但不影响PCR扩增结果。3 ARMS-PCR结果:TAP1333位点检测出三种基因型,分别为Ile/Ile、Ile/Val、Val/Val。A、B、C三管扩增产物大小分别为533bp, 351bp和241bp。TAP1637位点检测出两种基因型,分别为Asp/Asp和Asp/Gly,A、B、C三管扩增产物大小分别为429bp, 180bp,和307bp,在两组研究对象中均未检测出Gly/Gly基因型。4统计学结果: TAP1333和TAP1637位点基因型的分布频率在AR组及对照组中都分别以II和DD为主,经统计学处理,前者差异有显著性(P<0.05),后者无统计学意义(P>0.05); TAP1333和TAP1637位点等位基因型的分布频率在AR组及对照组中都分别以I和D为主,经统计学处理,前者差异有显著性(P<0.05);后者无统计学意义(P>0.05)。结论: TAP1333基因型和等位基因型频率的分布在正常人和AR患者中不同,结果有统计学意义,说明此位点基因多态性与AR具有一定相关性,属于AR易感基因群之一。而TAP1637基因型和等位基因型频率的分布在正常人和AR患者中无显著差异,结果无统计学意义,说明此位点基因多态性与AR无明显相关性。TAP作为AR易感/保护基因的可能性与患者的选择、不同人群及地域环境等客观因素有关,其具体遗传学意义还有待进一步研究阐明。