论文部分内容阅读
背景:长期饮酒所引起的酒精性肝病(alcoholic liver disease,ALD)已经成为我国人群慢性肝脏疾病的一个重要病因。辅助性T细胞17(helper T cells17,Th17)是新近发现的一个CD4+T细胞亚群,在多种免疫相关性疾病中激活并通过招募相应免疫细胞和分泌相关细胞因子(主要是IL-17)等方式发挥作用。本研究旨在通过改良小鼠胃造瘘模型研究Th17及其相关细胞因子在ALD发生发展中的作用,并阐述其机制。 方法:本研究使用成年(8周龄,体重20-25 g)雄性ICR小鼠建立改良型小鼠胃造瘘模型并随机分为以下几组:对照组1(Con),通过造瘘管生理盐水灌胃(30ml/kg·天,4周);酒精性肝病组1-3(ALD1-ALD3),60%酒精灌胃(30 ml/kg·天),时间分别为4、8、12周;酒精性肝病组4(ALD4),酒精灌胃采用的方式与时间与ALD3组相同,第9周开始每周通过尾静脉分别注射含有1μg抗IL-17抗体的生理盐水200μl。每组6只小鼠。建模完成后称取肝脏重量,计算肝重/体重比值;并收集各组小鼠血液标本及组织标本,评估各组小鼠肝脏组织学损伤情况,检测其肝功能、血浆细胞因子浓度、Th17细胞百分比、Th17相关转录因子mRNA浓度,进行组织标本二维差异凝胶电泳(two-dimensional difference gelelectrophoresis,2D-DIGE)、质谱(mass spectrometry,MS)确定差异蛋白并进行免疫印迹(western blotting,WB)实验。 结果:肝重/体重比值、肝酶及病理学检查发现随着ALD的进展,小鼠肝脏炎症、坏死的程度逐渐加深,同时肝脏表现出现进行性纤维化。以抗IL-17处理有效减轻酒精灌胃12周小鼠的肝脏坏死和肝硬化水平,注射抗IL-17抗体对肝功能具有保护作用。与对照组相比,除TNF-α外,酒精性肝病组小鼠各细胞因子在不同时相出现具有统计学差异的升高(除IL-23与IL-6的ALD1组外);而TNF-α在ALD1上升后不同时相出现下降趋势,注射抗IL-17引起IL-1b、IL-10、TNF-α水平明显升高,而IL-6、IL-17A、IL-23水平明显降低,有统计学意义。慢性酒精灌胃转录因子Rorγt出现具有统计学差异的升高,且这种升高呈现时间相关性;慢性酒精灌胃12周(ALD3)后IL-17、IL-21、IL-23等细胞因子转录水平明显升高,有统计学意义;注射含抗IL-17抗体的生理盐水抑制以上基因表达。Th17细胞百分比随着ALD的进展呈现上升趋势,ALD3组各指标显著高于Con组。抗IL-17抗体Th17细胞百分比下降,表明Th17细胞的分化受到了抑制。2D-DIGE和MS及WB分析表明碳水化合物反应原件结合蛋白(carbohydrate responseelement binding protein,CHREBP)、山羊固醇调节原件结合蛋白1c(sterolregulatory element-binding protein-1c,SREBP-1c)的随着ALD的进展呈现上升趋势,烯酰酯辅酶A水合酶1(enoyl-coenzyme Ahydratase,ECHS1)和过氧化物酶增殖子激活受体α(peroxisome proliferator-activated receptorα,PPARα)的表达随着ALD的进展呈现下降趋势,注射抗IL-17抗体抑制CHREBP、SREBP-1c的表达,而促进ECHS1、PPARα表达,表明抗IL-17抗体在肝细胞脂肪代谢过程中发挥抑制脂肪形成促进脂肪代谢的作用,减轻脂肪肝。 结论:Th17及其相关细胞因子参与ALD的发展过程,其作用机制可能与影响肝脏脂肪代谢有关;干预Th17及其相关细胞因子可能成为治疗酒精性肝病的治疗方法。