【摘 要】
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目的本课题组成功构建了突变型可溶性FGFR2Ⅲc胞外段(ED-1),为了探讨ED-1抑制肿瘤的分子靶标,不仅检测ED-1是否与FGF或FGFRs结合而抑制FGF信号通路,还检测它是否通过与EGFR结
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目的本课题组成功构建了突变型可溶性FGFR2Ⅲc胞外段(ED-1),为了探讨ED-1抑制肿瘤的分子靶标,不仅检测ED-1是否与FGF或FGFRs结合而抑制FGF信号通路,还检测它是否通过与EGFR结合而抑制EGF信号通路,从而探讨其成为双靶点抗肿瘤药的可能性。方法Q-PCR法检测各肿瘤细胞株的FGFRs与EGFR基因表达水平,初步筛选出合适的肿瘤细胞株。然后通过细胞水平和在体水平研究ED-1对肿瘤细胞的抑制作用。细胞水平上,主要是从细胞增殖和细胞周期等方面研究ED-1对肿瘤细胞的作用。ELISA法检测肿瘤细胞相应配体(FGF-2和EGF)的内源表达水平。Western blot检测ED-1对p-FGFRs与p-EGFR的抑制作用。在体水平上,ED-1能抑制裸鼠移植瘤的生长。结果根据Q-PCR结果,初步选定肺癌细胞H1299和乳腺癌细胞BT549作为目标细胞株。细胞水平上,CCK8法检测结果表明ED-1能抑制肿瘤细胞的增殖,且能抵消外源添加的FGF-2或EGF的促增殖作用。流式分析结果表明ED-1能够阻滞肿瘤细胞周期于G1期。Western blot检测结果证明,ED-1能下调FGFRs和EGFR的磷酸化。在体水平上,ED-1对裸鼠移植瘤的生长具有明显的抑制效果。上述实验均说明ED-1具有较好的抗肿瘤活性。结论本实验室构建的突变型可溶性FGFR2Ⅲc胞外段蛋白ED-1,可以作为治疗肿瘤的潜在双靶点(FGFR和EGFR)药物。
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