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A型流感病毒是造成人类及动物流行性感冒的单股负链RNA病毒，其不仅对人类和动物的健康产生威胁，同时为社会带来巨大的经济损失。A型流感的有效防控手段通常有两种:一是接种流感疫苗，但由于A型流感病毒存在多种亚型，又常出现抗原漂移，从而致使流感疫苗保护效果不济。二是研发抗病毒药物。也因为耐药性的产生，抗病毒药物的药效也迅速下降。因此研究防控A型流感病毒的新手段刻不容缓。随着宿主因子在病毒复制过程中的重要作用被陆续报道，因此宿主蛋白与流感病毒复制的关系也越来越受到关注。磷酸化修饰则是蛋白质翻译后修饰加工的一种手段，流感病毒当中可通过磷酸化修饰来发挥其重要功能。我们聚焦于影响宿主细胞整体磷酸化水平的宿主因子例如磷酸酶或激酶。希望能够为抗流感病毒新药物提供新的靶点。CDC25B(Cell division cycle25B)是CDC25激酶家族中的重要成员，编码酪氨酸磷酸酶。其通过磷酸化和去磷酸化修饰在细胞周期中发挥重要的作用，过量表达能够促进肿瘤的产生。此外CDC25B对流感病毒的复制也有一定的影响。为了研究CDC25B对A型流感病毒复制的调控，本文利用CRISPR/Cas9(Clusteredregularly Interspaced short palindromic repeats)系统构建了CDC25B低表达水平的HELA细胞系（CDC25B-/-HELA）。将A型流感病毒A/WSN/33(WSN)毒株分别感染CDC25B-/-HELA细胞与WT HELA细胞，发现CDC25B-/-HELA细胞中，流感病毒的复制与转录水平发生明显下调，NP蛋白则出现核内滞留的结果，同时出现vRNP聚合酶活性显著降低等现象。结果证明了CDC25B蛋白能够促进A型流感病毒的复制和转录。本研究进一步阐明了宿主蛋白对流感病毒的调控机制，并为新抗病毒药物的研究提供新的靶点。 本研究通过A型流感病毒NA蛋白作为抗原，建立间接ELISA(Enzyme linked immunosorbentassay)检测方法来快速检测流感病毒的亚型。实验参照GenBank上H5N1亚型流感病毒的NA基因与氨基酸序列，进行比对其同源性，最终选取A/duck/Shandong/009/2008(H5N1)毒株为目的毒株，其NA蛋白第139-400位氨基酸序列为目的片段。将该基因片段连入质粒pET-28a中，利用大肠杆菌BL21(DE3)进行表达及纯化。以纯化得到的重组蛋白N1作为抗原，构建H5N1亚型流感病毒NA蛋白间接ELISA检测方法。结果得到最佳抗原包被浓度是400ng/孔，血清的最佳稀释倍数为1∶20，酶标二抗稀释度是1∶5000。包被抗原，检测阳性血清P/N=15.579＞2.1为阳性，表明重组NA蛋白具有强抗原性。对该ELISA方法进行重复性试验、种内和种间试验特异性试验以及批内批间试验，结果表明该间接ELISA方法具有较高的特异性、敏感性以及重复性。此方法为N1亚型的流感病毒的检测与诊断提供一定的科研依据，并为以NA蛋白为基础的流感病毒检测试剂盒的研发奠定了基础。