论文部分内容阅读
目的：通过体内外实验观察中药单体人参皂苷Rg3、分子靶向药物索拉非尼、化疗药物奥沙利铂三种药物不同联合方式作用于HepG2肝癌细胞株与裸鼠人肝癌转移模型(LCI-D20)移植瘤的效果,并探讨对细胞周期及相关蛋白表达的影响,为中药、化疗药物和分子靶向药物联合治疗肝癌提供依据。方法：(1)通过MTT方法观察人参皂苷Rg3、索拉非尼、奥沙利铂单药及不同联合方式(两药联合、三药联合)在体外对HepG2肝癌细胞增殖的作用,并计算半数抑制浓度(IC5o)。(2)运用流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期分布情况。(3)运用western boltting方法检测人肝癌裸鼠转移模型肿瘤组织细胞周期相关蛋白p53、p21、p27、PTEN的表达情况。结果：(1)与对照组相比,除索拉非尼外,人参皂苷Rg3、奥沙利铂低浓度24h未能够充分发挥药效,对HepG2细胞没有明显的抑制作用(P>0.05),给药48h和72h三药对细胞有明显的抑制增殖作用(P<0.01)；三药单独作用于细胞24h、48h、72h后,随着浓度的升高对细胞抑制率均明显上升,同一药物相同浓度作用不同时间相比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。(2)联合用药后,与奥沙利铂单药组比较,奥沙利铂+人参皂苷Rg3组(P<0.05)及奥沙利铂+索拉非尼组抑制率增高(P<0.01)；与人参皂苷Rg3单药组比较,奥沙利铂+人参皂苷Rg3组及人参皂苷Rg3+索拉非尼组抑制率增高(均P<0.01)；与索拉非尼单药组相比,奥沙利铂+索拉非尼组及人参皂苷Rg3+索拉非尼组抑制率增高(P<0.01)；与各单药组、两药联合组相比,三药联合组抑制率明显增高(P<0.01)。经q计算,与单药组相比,奥沙利铂+人参皂苷Rg3联合表现为相加作用(q=0.92),人参皂苷Rg3+索拉非尼联合(q=1.39)及奥沙利铂+索拉非尼(q=1.23)联合表现为协同作用。与两药联合相比,人参皂苷Rg3+奥沙利铂基础上加索拉非尼(q=1.14)、奥沙利铂+索拉非尼基础上加人参皂苷Rg3(q=0.86)表现为相加作用,人参皂苷Rg3+索拉非尼基础上加奥沙利铂(q=1.17)表现为协同作用。(3)流式细胞术检测细胞周期发现,人参皂苷Rg3能将HepG2细胞阻滞于G0/G1期、奥沙利铂将细胞阻滞于S期、索拉非尼将细胞阻滞于G0/G1期,联合用药后：人参皂苷Rg3+奥沙利铂组细胞被阻滞于G0/G1期、S期；人参皂苷Rg3+索拉非尼阻滞于G0/G1期及S期；奥沙利铂+索拉非尼组细胞被阻滞于S期；人参皂苷Rg3+奥沙利铂+索拉非尼三药联合作用后细胞阻滞于G0/G1期、S期、G2/M期。(4)流式细胞术检测细胞凋亡情况发现,人参皂苷Rg3、奥沙利铂、索拉非尼单药、两药及三药联合对HepG2细胞均具有诱导凋亡作用。与阴性对照组相比,各用药组凋亡率显著增高(P<0.01)；与各单药组相比,两药组除人参皂苷Rg3+索拉非尼组对比人参皂苷Rg3作用不明显外,其余各组诱导凋亡作用均明显增强(P<0.05)；与各单药组及两药联合组相对比,三药联合组具有显著诱导凋亡作用(P<0.01)。(5)western bolting法检测发现,各单药组、两药联合组及三药联合组均可下调裸鼠人肝癌移植瘤细胞突变型p53的表达、上调p21、p27及PTEN的表达,联合用药较单药更加明显。结论：(1)人参皂苷Rg3、索拉非尼、奥沙利铂无论单药还是相互之间的联合对HepG2肝癌细胞增殖均有明显抑制作用,并且抑制作用呈现时间、剂量依赖性；两药及三药联合各组均表现为相加或协同作用。(2)各用药组均有诱导凋亡作用,三药组比两药组、两药组比单药组诱导凋亡作用明显。(3)各用药组主要将细胞阻滞于GO/G1期及S期,联合用药后阻滞作用更广泛。(4)进一步通过体内实验证实三药可以通过下调突变型p53的表达及上调一些相关周期蛋白的表达而发挥抑癌作用,联合用药较单药作用更明显。