目的:研究12-脂氧合酶(12-Lipoxygenase,12-LOX)抑制剂ML355对小鼠经脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导的炎症反应的拮抗效应及其分子机制。方法:1.将24只成年雄性C57BL/6小鼠按随机数字表法分为4组,对照组、LPS组(腹腔注射 LPS 20mg/kg)、ML355 预治疗组(30mg/kg、15mg/kg 的 ML355 提前1h腹腔注射+LPS)。建模后12h处死小鼠,收集外周血、腹腔灌洗液和腹腔巨噬细胞,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆和腹腔灌洗液中12羟基二十碳四烯酸(12-HETE)含量,测定腹腔灌洗液中干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素(IL-1β、IL-6、IL-10)、肿瘤坏死因子(TNF-α)水平及血清中IFN-y、IL-1β水平,采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞中IFN-y、IL-1β及花生四烯酸-15-脂氧合酶(Alox-15)的 mRNA 表达。2.体外培养小鼠原代腹腔巨噬细胞(PMs),随机分为4组,对照组、LPS组(LPS 20mg/L)、ML355 预处理组(25μmol/L、50μmol/L 的 ML355 提前干预 1h+LPS)。于LPS作用不同时间点收集各组的细胞上清和细胞团块。用qRT-PCR检测细胞中IFN-γ、IL-1β 及 Alox-15 的 mRNA 表达,ELISA 检测细胞上清液中 12-HETE、IFN-γ、IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10水平,通过蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测12/15-LOX及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路蛋白的表达。结果:1.LPS模型组血浆和腹腔灌洗液中12-HETE的含量较对照组显著增高。与LPS模型组比较,ML355预处理后可明显减少血浆和腹腔灌洗液中12-HETE含量,明显降低血清和腹腔灌洗液中IFN-γ水平,qRT-PCR结果显示ML355明显下调IFN-γ、IL-1β及Alox15基因表达。2.在体外实验中,与对照组比较,LPS刺激腹腔巨噬细胞后,上清中12-HETE含量呈升高趋势,但没有统计学差异,予以ML355预处理后12-HETE含量明显降低。与LPS组比较,ML355预处理后细胞上清IFN-γ水平显著下降,细胞内IFN-γ、IL-1β的基因表达明显下调,p38 MAPK的磷酸化水平差异无显著变化,而细胞外信号调控蛋白激酶(ERK)、c-Jun N末端激酶(JNK)的磷酸化水平及12/15-LOX蛋白表达减少。结论:(1)ML355可抑制小鼠经LPS诱导的炎症反应。(2)ML355能明显降低LPS刺激下炎性巨噬细胞中炎性因子IFN-γ的生成,其机制可能是通过抑制12/15-LOX、p-ERK、p-JNK 蛋白来实现的。