论文部分内容阅读
猪繁殖与呼吸综合征(俗称蓝耳病)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的猪的严重传染性疾病。目前,尚没有治疗PRRSV的有效手段。因此,寻找新的抗病毒治疗方法来弥补疫苗预防的不足显得尤为重要。长期以来,隐孔菌(Cryptoporus volvatus)常被作为一种传统抗感染中药使用。在本研究中,结合现代色谱分离及间接免疫荧光技术,从隐孔菌的干子实体内分离纯化出两种具有抗PRRSV活性的新型化合物和核糖核酸酶。此外,研究还发现隐孔菌水溶性提取物对CC14诱导小鼠肝损伤具有保护作用。利用隐孔菌干子实体,通过去离子水抽提,综合运用HP-20、HP-2MGL大孔吸附层析、DEAE-cellulose离子交换层析、LH-20葡聚糖凝胶过滤和HPLC反相色谱等方法,最终分离得到一种具有抗PRRSV活性的新型化合物CM-H-L-5。隐孔菌水提物中不同组分的抗PRRSV效果各异;CM-H-L-5对PRRSV抑制作用呈剂量依赖性;CM-H-L-5可抑制PRRSV HV毒株的体外复制,其EC50为0.29mg/ml; CM-H-L-5是一具酰胺基团与羧酸基团的小分子多元醇组分,分子量为403.1Da。实验表明CM-H-L-5具有作为药物治疗PRRSV的潜力。通过DEAE-cellulose、Q-sepharose、Mono Q离子交换层析和Superdex 75凝胶过滤等方法,以隐孔菌的干子实体为材料,分离纯化出一种具有抗PRRSV活性的RNase。隐孔菌RNase是一个分子量为50kDa的大分子蛋白,最适反应温度为50℃,最适反应pH为4,其部分肽段序列与草酸青霉RNase序列存在较高的同源性。该酶体外降解tRNA的活性较强。高浓度的Cd2+ (10mM)和低浓度的Fe3+ (1.25mM)对该酶活性有较强抑制作用。免疫荧光实验表明该酶可抑制PRRSVHV毒株的体外复制,其EC50为0.25mg/ml。为发掘隐孔菌的保肝价值,研究隐孔菌水提物对CC14诱导的小鼠体内总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、丙二醛(MDA)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)及肝细胞损伤程度的影响。采用四氯化碳(CC14)诱导小鼠急性化学性肝损伤模型,将动物随机分成5组,分别是空白对照组、模型组、阳性对照组、隐孔菌水提物低剂量组、高剂量组,试验结束后,检测各组小鼠血清及肝脏组织提取液各项肝功能指标并观察肝脏的病理损伤情况。隐孔菌水提物能明显降低CC14急性肝损伤小鼠血清AST、ALT,肝组织提取液MDA、T-SOD、GSH-PX值,还可减轻肝细胞坏死程度,表明隐孔菌水提物对CC14诱导的肝损伤有明显保护作用。