论文部分内容阅读
目的:通过检测结核病患者血浆维生素D水平,比较患者维生素D水平与健康受试者的差异,分析维生素D缺乏与结核病发病及病情严重程度之间的相关性;通过对患者维生素D受体基因多态性的检测,探讨不同受体基因型与结核病发病及病情严重程度之间的关系。联合分析人体维生素D水平、维生素D受体基因多态性与结核病三者之间的关系,为进一步开展大规模维生素D缺乏及维生素D受体基因多态性与结核病之间关系的研究提供依据,也为结核病高危人群进一步的确定以及维生素D用于结核病的预防和治疗提供参考。方法:建立UPLC-MS/MS测定人血浆维生素D的方法并测定健康受试者及结核病患者血浆中25(OH)D2与25(OH)D3的浓度,求和得出25(OH)D的血浆浓度。以血浆中25(OH)D浓度为12ng/ml和20ng/ml分别作为维生素D缺乏、不足和充足的分界点标准,将入组受试者按维生素D水平分为三组,了解不同组受试者的维生素D水平及维生素D状态的分布差异,分析维生素D水平与结核病易感性之间的关系。建立聚合酶链反应及限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)方法并测定入组受试者维生素D受体在Fok I、Bsm I、Apa I和Taq I四个位点的基因多态性,按照不同的基因型分组,对比入组受试者维生素D受体基因型分布的差异,分析维生素D受体基因多态性与结核病易感性之间的关系。收集入组受试者的一般资料以及患者的相关临床和实验室检查资料,包括发病现状(是否耐药、是否复治)、严重程度(病灶范围、空洞形成)及常见伴发病(肺外结核、糖尿病)等,再将入组患者按照上述不同的临床特征分组,对比不同组患者的维生素D水平及维生素D受体基因型分布,联合分析人体内维生素D水平及维生素D受体多态性与结核病发病及病情严重程度之间的相关性。结果:本研究所建立的UPLC-MS/MS法在25羟基维生素D2(r=0.9980)和25羟基维生素D3(r=0.9999)于2~80ng/ml浓度范围内与峰面积呈良好线性关系,日内、日间的准确度(RE)和精密度(RSD)均小于10%,定量下限和检测下限分别为2ng/ml和0.5ng/ml,适用于人血浆中25(OH)D的定量分析。入组结核病患者180例及健康志愿者59例,结核病患者再根据药敏结果分为药物敏感组128例和耐药结核组52例。在全部受试者中,与健康志愿者(C=21.97 ng/ml)相比,药物敏感组患者(C=10.42 ng/ml)和耐药结核组患者(C=11.11 ng/ml)的25(OH)D平均浓度明显更低(P<0.001);在结核病患者中,与表现双肺病变的患者相比,病灶局限在单侧的患者维生素D水平相对更高(P=0.030);在耐药患者中,与合并肺外结核的患者相比,不合并肺外结核的患者维生素D水平相对更高(P=0.001)。研究各位点基因多态性,与健康对照组相比,Ff基因型(P=0.001)、ff基因型(P<0.001)及f等位基因(P<0.001)在药物敏感组患者中出现的频率更高,ff基因型(P<0.001)和f等位基因(P<0.001)在耐药结核组患者中出现的频率同样更高。此外,在结核病患者中Ff基因型(OR 0.16,95%CI 0.06-0.45)、ff基因型(OR 0.35,95%CI 0.13-0.93)和Bb基因型(OR 0.13,95%CI 0.02-0.99)患者合并肺外结核的比例更低;在男性患者中ff基因型患者复治比例(P=0.025)和发生空洞的比例(P=0.001)相对更高;在非耐药患者中,AA基因型患者出现空洞的比例相对更高(P=0.008);未发现Taq I位点VDR基因多态性与各临床特征之间存在任何相关性。分析维生素D水平与维生素D受体基因多态性的关系,结果显示bb基因型患者的维生素D水平显著高于Bb基因型的患者(P<0.05);并未发现其他位点各组基因型对三组人群的维生素D水平有影响。结论:维生素D水平、维生素D受体基因多态性与结核病的发病及病情严重程度之间存在着一定的相关性。维生素D缺乏的人群可能更容易罹患结核病,维生素D缺乏的患者病情可能更加严重,更容易侵及双肺、合并肺外结核。Fok I位点的基因多态性可能与结核病患病有关,表现为ff基因型的人群可能更容易感染结核病。