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2b蛋白由PRRSV的ORF2b所表达的结构蛋白，又称为GP2b蛋白，该结构蛋白对PRRSV感染宿主细胞起着重要作用，本研究通过酵母双杂交技术来筛选与PRRSV2b蛋白互作的PAM蛋白，主要研究内容包括三个方面。 第一步，构建文库菌株：以15日龄健康仔猪为原材料，分离培养猪肺泡巨噬细胞（PAM），从PAM中提取总RNA，以总RNA为模板合成cDNA。将扩增后的cDNA以同源重组的方式与线性载体pGADT7-Rec进行重组，并转化入Y187酵母感受态中，培养于SD/-Leu平板上。经培养后，随机挑取若干菌落进行PCR检测后并收获文库菌株，经文库滴度检测，文库的库容达6.69×107 cfu/mL。 第二步，钓饵菌株的构建：以PRRSV的CH-1R株为原始材料，提取基因组RNA，采用RT-PCR扩增2b基因。将2b基因扩增产物经双酶切后克隆至pGBKT7质粒上，构建出pGBKT7-2b重组钓饵载体。将钓饵载体转化入Y2H Gold酵母感受态中，培养于SD/-Trp平板上。经自激活检测和毒性检测，该钓饵菌株无自激活和毒性现象。提取酵母中的pGBKT7-2b重组载体，经酶切后电泳证实了钓饵菌株的构建成功。 第三步，互作蛋白的筛选及序列分析：将文库菌株与钓饵菌株进行杂交融合，并将杂交后的酵母培养物涂布于营养双缺失的DDO/X/A平板上进行培养，生长出的蓝色菌落转接至四缺培养基QDO/X/A平板上，并将依然为蓝色菌落进行菌落PCR检测，PCR检物进行测序，将测序后的碱基序列进行分析。将分析结果归类并命名为SX-1、SX-2、SX-3和SX-4等，该筛选结果经亲缘性比对后，分别得出与LGALS1、RPL12、LGALS3和RPS20等4种蛋白亲缘关系最近。其中，LGALS1出现机率最高。