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深部沉积物生命的发现使人类研究地球的地理、地质、生命历史等方面均产生了极大的改变和发展,也为人类研究全球物质能量循环和生命起源提供了新思路。为此,2012年实施了国际大洋钻探计划(IODP)第337航次,该航次钻孔位于太平洋西北部日本下北半岛(Shimokita Peninsula)80km处取样点Site C0020A(41°1035”N,142°1201”E),航次任务为探索洋底深部生命与碳循环系统(Exploration of the Deep Life and Carbon System beneath the Ocean)。本课题组获得了从1288mbsf到2457mbsf深的垂直分布的洋底沉积物岩芯样品48个,这也是目前科学钻探计划中获得的最深样品。该研究将通过培养基和培养条件筛选、菌种鉴定、菌种分布与环境的关系分析以及对重金属的耐受性、岩石的风化能力等方面进行研究,揭示洋底深部真菌多样性及其环境适应机理,主要结果如下: 1、通过培养基、培养条件筛选实验,获得适合洋底真菌培养的混合培养基FM1及培养条件(厌氧,30℃)。在此条件下,从25个沉积物样品中分离获得真菌38株。根据形态学观察结合分子生物学分析结果,有32株真菌属于子囊菌(Ascomycota)的13个属,分别为支顶孢属(Acremonium),荠假小尾孢属Pseudocercosporella),曲霉属(Aspergillus),短梗霉属(Aureobasidium),生赤壳属(Bionectria),假丝酵母属(Candida),毛壳菌属(Chaetomium),枝孢菌属(Cladosporium),散囊菌属(Eurotium),外瓶霉属(Exophiala),黑孢属(Nigrospora),青霉属(Penicillium)和侧弯孢壳属(Eutypa),占洋底可培养真菌的83%;6株属于担子菌(Basidiomycota)的3个属,分别为耙齿菌属(Irpex),裂褶菌属(Schizophyllaceae)和烟管菌属(Bjerkandera),占洋底可培养真菌的17%。 2、比较了ITS与部分28S rRNA基因序列在真菌系统进化分析中的差异,发现利用ITS序列能够更好地反映真菌的种属进化关系,系统进化树分支清晰, bootstrap值大于95%。而基于部分28S rRNA序列构建的系统发育进化树,虽然也能反映不同真菌之间的遗传进化关系,但bootstrap值较低。表明利用ITS构建系统发育进化树能够更有效地判断不同真菌的亲缘关系,尤其在属以上水平的分类比基于28S rRNA序列构建的系统发育进化树更准确。 3、使用多种多样性指数来评定洋底真菌群落组成的多样性,物种多样性在3个地质单元中十分相似,从9到13,Margalef指数,Pielous丰富度指数和香农多样性指数变化范围为2.08-3.22,0.77-0.98和1.78-2.71。尽管数据显示物种丰富度在单元Ⅳ相比单元Ⅱ,单元Ⅲ明显减少,然而最低的物种密度却是在单元Ⅲ,而不是单元Ⅱ、单元Ⅳ。真菌数量的垂直分布与深度无显著关系,显示真菌可能为洋底沉积物中的重要组成部分。 4、真菌在洋底沉积物中分布十分广泛,从1200mbsf的中新世到2400mbsf的晚渐新世-中新世早期均分离到可培养真菌,其中子囊菌门的曲霉属、青霉属、枝孢菌属和担子菌门的裂褶菌属真菌分布最广,几乎分布于所有的地质层,属于洋底深部环境优势真菌类群。此外,Penicillium citrinum和Schizophyllum commune为洋底煤层的优势种,Cladosporium sphaerospermum32R-1-F01和Aspergillussydowii32R-1-F02是目前报道分布最深(2.5km mbsf)的洋底真菌。 5、通过对真菌分布与原位环境因子的主成分分析,发现总氮量、深度、盐浓度、有机碳含量、含水量、碱度、钙离子、硫酸根离子浓度、甲烷含量等9个原位地质因子与洋底真菌的分布有关,且可归纳为3组主成分(F1,F2,F3),累计贡献率为85.44%,其中F1(主要因子:TN、深度、盐浓度、TOC、SO42-和MC)、F2(主要因子:IWC和Ca2+)和F3(主要因子:IWC和碱度)。 6、采用液体培养方法,探讨了真菌对原位沉积物的厌氧风化作用,发现洋底真菌具有一定的岩石风化功能,能够将原位岩石分化为可溶的无机钙离子。其中Penicillium citrinum14R-2-F05在厌氧条件下对碳酸钙纯品(对照)的风化率为9.80%,而对原位岩石的风化率为38.84%,远高于好氧条件下的26.54%。预示着洋底真菌在元素的厌氧地球化学循环中发挥重要作用。 7、评价了洋底真菌对重金属离子的耐受性,发现Penicillium funiculosum14R-2-F01能够在1000ppm的Cu2+、Mn2+和Ba2+浓度下生长,表现出极高的重金属离子耐受性。此外,该菌还对Cu2+、Cd2+和Ba2+有很强的富集能力,这一特性增强了洋底真菌对环境的适应性。 总之,真菌为洋底沉积物生态系统的重要组成部分,具有丰富的物种多样性和极强的环境适应性,在洋底沉积物元素生物地球化学循环中可能发挥重要作用。