黄瓜花叶病毒(CMV)是一种经济重要性植物病原，而且，该病毒越来越多地被作为模式病毒用于病毒与寄主的互作研究。CMV基因组由3条单链正义RNA组成，共编码5种蛋白。其中，由RNA2的亚基因组RNA4A编码产生的2b蛋白，是一个多功能蛋白。CMV2b蛋白能有效地抑制小RNA介导的RNA沉默和水杨酸介导的CMV抗性。此外，CMV2b蛋白在病毒的致病性和病毒在植物体内的长距离的移动扮演重要的角色。CMV2b蛋白由于其编码1个（亚组II株系）或2个（亚组I株系）核定位信号（NLS）而定位于细胞核。至今，介导CMV2b蛋白核输入的分子机制仍未阐明。核蛋白进入细胞核主要通过核转运蛋白（Karyopherin或Importin）alpha/beta途径。作为模式植物拟南芥，共编码9种Importinalpha蛋白（IMPa1-9）。那么，CMV2b蛋白是否通过与Importinalpha互作进入细胞核？为回答这个问题，首先，本论文通过常规RT-PCR扩增获得拟南芥IMPa1-9编码序列；其次，通过酵母双杂交实验没有检测到IMPa1-9蛋白与CMV2b蛋白的互作；为了进一步证实IMPa与CMV2b蛋白的互作情况，我们利用双分子荧光互补技术（BiFC）在植物体内检测拟南芥IMPa1-9与CMV2b蛋白的互作，检测结果发现IMPa2、IMPa3和IMPa6与CMV2b蛋白发生互作；进而，我们利用重叠PCR技术将CMV2b蛋白NLS1和NLS2序列替换为丙氨酸(A)，最终构建两个单突变体Fny2bNLS1-6A-YFPC、Fny2bNLS2-4A-YFPC以及双突变体Fny2bNLS1,2-6A,4A-YFPC，利用BiFC检测这三种突变体与IMPa2、IMPa3和IMPa6的互作。荧光观察结果显示：除Fny2bNLS2-4A-YFPC与IMPa3共表达呈现弱荧光信号之外，其它均没有检测到荧光信号。这说明NLS1和NLS2是CMV2b蛋白与IMPa2和IMPa6的互作所必需的，IMPa3则很可能是通过识别NLS1与Fny2b蛋白发生互作。再者，我们通过农杆菌浸润将GFP-2b与IMPa2、IMPa3或IMPa6进行瞬时共表达。荧光观察结果显示：IMPa2的瞬时表达显著增强CMV2b蛋白的细胞核积累；而且，二者的共表达导致浸润叶组织的坏死表型。之后，利用拟南芥突变体测试IMPa蛋白对CMV症状产生的影响。本实验利用2b蛋白高度核定位的CMV突变体Fny-CMV2bNLS进行病毒侵染实验，该病毒侵染野生型拟南芥导致系统叶的严重坏死。症状观察结果显示：与野生型的拟南芥植物比较，在拟南芥impa2突变体表现的坏死表型显著减弱。这些结果都说明CMV2b蛋白的细胞核定位很可能与IMPa2蛋白的互作有关；最后，我们通过GFP融合，观察IMPa2、IMPa3和IMPa6在细胞中的亚细胞分布。结果表明：与对照GUS-GFP相比，三者均有不同程度的细胞核积累。其中，IMPa2主要定位于细胞核。综上所述，通过本论文的研究，我们初步确定亚组I株系CMV编码的2b蛋白与拟南芥IMPa2、IMPa3和IMPa6三者发生互作，而且，IMPa2介导CMV2b蛋白的细胞核定位。