抗bcl-2核酶(ribozyme)促进HL-60细胞凋亡的研究

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在本实验中,我们合成锤头型RZ以切割bcl-2 mRNA,然后用逆转录病毒载体pDOR-neo把RZ基因转染入HL-60细胞,以观察RZ对HL-60细胞的致凋亡效应。 通过微机对bcl-2 mRNA二级结构的分析,设计并合成针对bcl-2 mRNA的“锤头型”(hammerhead)核酶基因,平端连接于pGEM-3Zf(-)的HincⅡ位点,克隆后经测序表明序列正确,bcl-2和RZ基因经体外转录,50℃作用2h,发现RZ从第1656-1657(C-G)位之间切断了bcl-2 mRNA,表现出很强的切割活性,RZ基因经双酶切回收后,定向克隆于真核表达载体pDOR-neo的BamHI和EcoRI位点,重组的真核表达载体命名为pDOR-RZ。 通过脂质体(lipofectin)介导的DNA转染法,成功地把pDOR-RZ导入HL-60细胞。HL-60细胞在含10%小牛血清的培养液中继续培养72h。用RNA斑点杂交和原位杂交的方法都已观察到RZ基因在HL-60细胞内的表达。用电镜技术,流式细胞仪(FCM)和DNA电泳技术分别研究了RZ对HL-60细胞的影响。结果表明:(1)RZ在转染HL-60细胞后72h得以表达。(2)由于RZ的表达,细胞内Bcl-2蛋白
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