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脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)是一种B族单端孢霉烯毒素,对人和动物有毒性作用。子宫在雌性动物生殖系统中扮演着重要的作用,子宫异常会导致流产、着床异常和不孕等疾病。由于DON的细胞毒性,其已在多种类型细胞中被研究过,但是DON对小鼠子宫内膜基质细胞毒性作用的研究较少。本实验以小鼠子宫内膜基质细胞为细胞模型研究DON的体外细胞毒性并探索其潜在的作用机制,为揭示DON对小鼠子宫内膜基质细胞毒性作用的分子机制奠定基础。采用CCK-8、TUNEL、流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期、real-time PCR、western blot等方法研究DON对小鼠子宫内膜基质细胞的毒性作用及潜在作用机制的探索。研究结果如下:(1)DON处理显著地抑制了小鼠子宫内膜基质细胞活力(p<0.05),随着DON浓度的升高细胞活力逐渐降低,且呈剂量和时间依赖性。DON浓度为200ng/ml时,细胞开始出现皱缩,漂浮较少,当浓度达到1600ng/ml时,细胞基本都漂浮,死亡。(2)TUNEL和流式细胞仪检测凋亡结果表明DON显著地诱导了小鼠子宫内膜基质细胞的凋亡(p<0.05),且细胞凋亡率随着DON浓度升高而逐渐升高。DON诱导了小鼠子宫内膜基质细胞的氧化应激,极显著地降低了细胞的线粒体膜电位(p<0.01)。Real-time PCR结果显示DON极显著地提高了凋亡相关基因Caspase-9、Caspase-3 以及 PARP 的 mRNA 表达水平和 Bax/Bcl-2 的比率(p<0.01);western blot结果表明DON显著地提高了 Bax/Bcl-2的比率(p<0.05),极显著地提高了 Caspase-9、Caspase-3和PARP蛋白表达水平(p<0.01),这些结果表明DON通过线粒体凋亡通路诱导了小鼠子宫内膜基质细胞凋亡。(3)DON诱导了小鼠子宫内膜基质细胞G2期阻滞,与对照组相比,随着DON浓度升高,G2期比例显著增加(p<0.05)。Wetern blot结果显示DON对p38蛋白表达水平没有影响,但是显著地提高了 p-p38蛋白水平(p<0.05),DON显著地降低了G2 期相关蛋白(Cdc25C/p-Cdc25C,Cdc2/p-Cdc2 和 cyclinB1)表达水平(p<0.05);使用p38抑制剂SB203580预处理显著地逆转DON对这些蛋白表达水平的影响(p<0.05)。Real-time PCR结果显示DON显著地降低了 G2期阻滞相关基因(Cdc25(’,Cdc2和cyclinB1)的mRNA表达水平(p<0.05),SB203580逆转了这一结果。这些数据表明p38信号通路通过下调Cdc25C/p-Cdc25C,Cdc2/p-Cdc2和cyclinB1的表达水平参与了 DON诱导的小鼠子宫内膜基质细胞G2期的阻滞。