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目的探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)对不同阶段哮喘大鼠气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cells, ASMCs)增殖及对ASMCs上ERK1/2 mRNA、p-ERK1/2表达水平的影响。方法健康雄性Wistar大鼠15只,体重均约250g,适应性喂养1周后,平均分为三组,实验组采用卵清白蛋白腹腔注射致敏大鼠,两周后用卵清白蛋白雾化吸入激发。一组激发2周(哮喘的早期阶段),另一组激发6周(慢性哮喘模型)。对照组以生理盐水代替卵清白蛋白腹腔注射和雾化吸入。哮喘模型建立后实验分为两部分：1.探讨TGF-β1对不同阶段哮喘大鼠ASMCs增殖的作用。取大鼠气道平滑肌细胞进行原代培养,均以1μg/L、10μg/L、100μg/L TGF-β1干预ASMCs生长,实验分为5组：(1)对照组、(2)模型组、(3)、(4)、(5)组分别为不同浓度的TGF-β1干预组。采用流式细胞仪、四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组ASMCs增殖情况,观察不同浓度TGF-β1对ASMCs增殖的影响。2.探讨TGF-β1对不同阶段哮喘大鼠ASMCs上ERK1/2 mRNA、p-ERK1/2表达水平的影响。以10μg/L TGF-β1及细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)的特异性抑制剂PD98059干预ASMCs生长。实验分为5组：(1)对照组、(2)模型组、(3)TGF-β1干预组、(4) PD-98059组、(5) TGF-β1+PD-98059组。采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测ASMCs上ERK1/2 mRNA表达,免疫细胞化学染色法检测磷酸化ERK1／2蛋白的表达及定位。结果1.(1)2周和6周哮喘组ASMCs的S期比例、A值分别与对照组比较均显著增高(均P<0.01)。2周、6周哮喘模型组的各TGF-β1干预组ASMCs的S期比例、A值、与各自哮喘组比较均显著升高(均P<0.01),10μg/L和100μg/L TGF-β1组比1μg/L TGF-β1组对ASMCs增殖作用明显增加(P<0.01), 10μg/L TGF-β1组和100μg/L TGF-β1组相比,ASMCs增殖细胞占细胞总数的百分比无明显变化,两种浓度增殖作用无有明显差别(P>0.05)。而2周和6周哮喘组相比,加入不同浓度TGF-β1干预后的差别不大(P>0.05)。(2)各干预组S期细胞所占比例与TGF-β1浓度之间呈剂量依赖关系,随TGF-β1干预浓度的增加,S期细胞所占比例逐渐增加。2.与正常对照组ASMCs比较,2周、6周哮喘组ERK mRNA、ERK1/2蛋白、p-ERK1/2蛋白的表达量以及ERK活化率显著增高。经PD98059干预之后,2周、6周哮喘组ASMCs的ERKmRNA、p-ERK1/2蛋白的表达量以及ERK活化率均显著降低。经TGF-β1干预后,2周、6周哮喘组ASMCs的ERK mRNA、p-ERK1/2蛋白的表达量较各自哮喘组显著增高,而这一作用可以被PD98059部分抑制。但以上结果2W和6W哮喘模型组之间差别无统计学意义。3.直线相关性分析显示,2周哮喘模型组气道平滑肌S期细胞所占比例与ERK1/2 mRNA和p-ERK1/2表达水平呈正相关(分别为r=0.839,r=0.781,P均<0.01)；6周哮喘模型组气道平滑肌S期细胞所占比例与ERK1/2 mRNA和p-ERK1/2表达水平也呈正相关(分别为r=0.877,r=0.843,P均<0.01)。结论1.与正常鼠相比,2周、6周哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖明显,处于S期的细胞比例明显增高。经TGF-β1干预后,2周和6周哮喘哮喘大鼠气道平滑肌细胞处于S期的细胞比例增加,增殖增强,但两组之间无明显差异,提示TGF-β1可能在哮喘早期阶段即可促进大鼠气道平滑肌细胞增殖,并可促进各阶段哮喘大鼠气道平滑肌细胞持续增殖。2.TGF-β1可上调不同阶段哮喘大鼠气道平滑肌细胞上ERK1/2 mRNA及p-ERK1/2表达。在哮喘的不同阶段,TGF-β1可能持续通过促进ERK信号转导通道的活性对气道平滑肌细胞的增殖进行调控。