鸭病毒性肿头出血症(Duck viral swollenhead hemorrhagic disease, DVSHD)是由鸭病毒性肿头出血症病毒(Duck viral swollenhead hemorrhagic disease virus, DSHDV)引起鸭的急性传染病。临床症状表现为病鸭头颈肿胀、眼结膜充血出血、肝脏肿大呈土黄色并伴有出血斑点、体温升至43℃以上、排草绿色稀粪等。该病发病率高死亡率高,各种年龄阶段、各品种的鸭均可感染,涉及品种有天府肉鸭、樱桃谷鸭、北京鸭等,最早3日龄开始发病,最迟500日龄仍然有发病,该病是近年来严重危害养鸭业的一种新的传染病。经过流行病学调查、病理剖解、病原的分离鉴定、超薄切片观察、理化特性测定、交叉中和试验等一系列研究,初步认为该病是由呼肠孤病毒引起的一种新型传染病,目前只有少量资料报道。本研究对DSHDV强毒生物学特性及其免疫原性展开研究,获得以下系列结果：1.鸭病毒性肿头出血症病毒强毒对鸭胚成纤维细胞的适应及其增殖规律：将DSHDV人工感染青年鸭成功复制出典型的临床病例,症状与之前报道一致。病毒可适应在10日龄鸭胚中增殖；将DSHDV鸭胚尿囊液感染DEF细胞,盲传2次即可适应DEF细胞,连续传代5次后细胞病变时间稳定,CPE一般出现于感染后72 h; DSHDV在DEF上的病毒滴度(TCID50)随传代次数增加而逐渐增加,到第5代时趋于稳定的水平,达到106.55-106.91／ml。病毒在接种细胞后,毒价呈现出先下降再逐渐上升的特点,0 h-8 h毒价直线下降,8 h-72 h快速上升,72 h-120 h毒价较高,是收获该DSHDV细胞毒的最适时间。2.鸭病毒性肿头出血症病毒强毒的形态发生学和鸭胚成纤维细胞的病理变化：电镜下可见DSHDV病毒粒子呈圆形或椭圆形,无囊膜,具有双层核衣壳,成熟病毒外衣壳直径75 nm-85 nm,平均80 nm左右；病毒空衣壳直径为60 nm-75 nm；病毒粒子复制早期多散在于细胞胞浆内,随着子代病毒的增多,聚集在胞浆包涵体结构中。DSHDV病毒粒子通过吸附于DEF细胞膜表面而进入细胞,在胞浆中完成脱壳、复制和装配过程,子代病毒粒子通过细胞膜破裂的方式释放到胞外。在感染后12 h首次于细胞浆中观察到子代病毒粒子；在感染后24 h首次观察到包涵体结构。被DSHDV感染的DEF细胞的超微结构病变主要表现为：细胞核变形,染色质异常聚集,线粒体和粗面内质网严重扩张,胞浆出现大量空泡,部分细胞发生融合和凋亡变化,感染后期细胞中还出现大量的不规则形状的包涵体。3.鸭病毒性肿头出血症病毒强毒致体外培养的鸭胚成纤维细胞凋亡：(1)光学显微镜和电子显微镜下均可观察到DSHDV诱导DEF细胞出现典型的细胞凋亡形态学变化：如细胞质浓缩,细胞核变形严重,染色质高度凝集、边缘化,内质网、线粒体空泡化,晚期出现大量大小不一、形态各异的凋亡小体；(2)琼脂糖凝胶电泳检测显示,受感染细胞的DNA降解形成的典型梯状条带；(3)Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞仪检测显示,凋亡细胞的比率从感染后24 h快速上升,96 h的达到凋亡的最高峰,而后逐渐下降,同时伴随着坏死细胞的比例逐渐升高；(4)AnnexinV-FITC/PI双标记的感染DEF细胞经荧光显微镜可观察到发出阳性荧光信号的凋亡细胞。4.鸭病毒性肿头出血症病毒的提纯及其形态观察：通过对多种DSHDV纯化方法的比较研究,最后采取了反复冻融、差速离心、PEG 6000沉淀、30%蔗糖垫底超速离心以及CsCl不连续密度梯度离心相结合的方法对DSHDV进行纯化,结果证实该方法快速高效,纯化的病毒纯净。负染可见成熟的DSHDV病毒粒子呈球形,无囊膜,直径在80 nm-85 nm之间,表面颗粒状突起,内部有电子密度较深的区域。5.鸭病毒性肿头出血症病毒结构蛋白分析：将纯化获得的DSHDV病毒制备成抗原多点多次免疫家兔,成功制备了兔抗DSHDV的高免血清,并通过辛酸-硫酸铵粗提及High Q阴离子交换柱纯化兔抗DSHDV的血清IgG。蛋白质变性凝胶电泳结果显示：DSHDV病毒颗粒由10条主要结构蛋白(Virus structural protein, VP)组成,分子量由大到小依次为VP1、VP2、VP3...VP10 (MW:151、129、115、90、76、66、56、52、39、35kDa);免疫印迹结果显示VP2、VP4、VP5 (MW:129、90、76kDa)三种结构蛋白具有免疫原性。