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目的：肥胖症严重危害着人们的健康，与糖尿病(DM)、冠心病(CHD)、高血压(HBP)、脂代谢紊乱及动脉粥样硬化(AS)等疾病的发生密切相关。脂肪组织的变化是肥胖症发生的根本原因，脂联素(adiponectin，ADI)是由脂肪组织分泌的一种特异性蛋白，在机体糖脂代谢中起着重要的调节作用，亦成为治疗肥胖的新靶点。本课题以3T3-L1细胞系为工具，利用分子生物学技术，从30味中药中筛选对人ADI基因启动子表达有影响的药物，进一步探明此类中药治疗肥胖的分子生物学机理，为临床应用提供药理学基础。方法：1．制备30种不同浓度中药水溶性提取物(Extracts of Chinese MedicalHerbs， ECMH)，常规体外培养小鼠前体脂肪细胞3T3-L1，分别以浓度为（0.001、0.01、0.1、1、10）mg/ml的ECMH刺激3T3-L1前体脂肪细胞24h，通过细胞形态学和MTT法初步筛选出对细胞有影响但损伤较小的最高药物浓度进行下步实验；2．采用实时荧光定量PCR(realtime fluorescence quantitative PCR，RT-PCR)技术分别检测30种ECMH对小鼠3T3-L1前体脂肪细胞和成熟脂肪细胞分泌因子ADI mRNA水平的影响，根据统计分析结果筛选数味药进行下步实验；3．利用PCR技术从人全血基因组DNA中分别扩增出1.1kb和2.1kb长度的ADI基因启动子片段，经纯化酶切后克隆入载体荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic中，形成重组质粒ADI promoter1.1-pGL3-Basic和ADI promoter2.1-pGL3-Basic，以pcDNA3.1-EGFP为对照载体，在脂质体（lipofectamine2000）介导下将以上4个质粒瞬时转染到3T3-L1前体脂肪细胞中，以此为工具，将24h后加入（0.01、0.1、1）mg/ml的ECMH刺激此细胞模型24h，收集细胞，测其荧光素酶活性，筛选出对人ADI启动子表达有影响的药物。结果：1．ECMH刺激3T3-L1前体脂肪细胞24h后均使细胞发生形态变化，MTT法检测显示不同浓度ECMH不同程度抑制3T3-L1前体脂肪细胞增殖，且呈剂量-效应关系，各药10mg/ml ECMH作用于细胞均具有统计学意义(P﹤0.05)，除生地、大枣、泽泻、栀子外，1mg/ml ECMH均具有统计学意义(P﹤0.05)，结合各药各浓度ECMH对细胞形态影响，确定细胞给药浓度为1mg/ml；2．利用RT-PCR技术测定了浓度为1mg/ml ECMH对诱导前和诱导后的3T3-L1细胞ADI mRNA表达，结果显示，番泻叶、黄芩和首乌ECMH明显促进3T3-L1前体脂肪细胞ADI mRNA的表达(P﹤0.05)，罗布麻、首乌、番泻叶、荷叶、黄芩、柴胡、大黄、枸杞、山楂ECMH不同程度促进3T3-L1成熟脂肪细胞ADI mRNA的表达(P﹤0.05)，初步筛选出以上9味药；3．从人全血基因组DNA中PCR扩增得到长为1.1kb(-1066To+4bp)和2.1kb(-2114To+4bp)长度的ADI基因启动子片段，并将其克隆到荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic上，构建了2种重组质粒，将其命名为ADI promoter1.1-pGL3-Basic和ADI promoter2.1-pGL3-Basic，测序证实所插入的目的片段与GenBank检索的人ADI启动子序列99.6％匹配；4．瞬时转染24h后即可在荧光显微镜下观察到pcDNA3.1-EGFP组发出绿色荧光，提示转染效率较高，成功获得表达荧光素酶活性的瞬时转染的3T3-L1前体脂肪细胞系，(0.01、0.1、1)mg/ml的RT-PCR初筛的9味ECMH刺激此细胞模型24h后，番泻叶、大黄、黄芩、山楂对人ADI基因启动子1.1kb荧光素酶活性有影响(P﹤0.05),但未检测出人ADI基因启动子2.1kb荧光素酶活性。结论：1．不同药物不同浓度ECMH均不同程度地影响前体脂肪细胞的增殖分化，同时影响小鼠ADI mRNA表达水平。2．表达荧光素酶活性的瞬时转染的3T3-L1前体脂肪细胞模型的建立，可以灵敏、快捷、高效地从众多中草药中筛选出对人ADI基因启动子荧光素酶活性表达有影响的药物。3．番泻叶、大黄、黄芩、山楂能够促进人ADI基因启动子的荧光素酶活性，提示这些中药的减肥功效可能与促进ADI基因启动子荧光素酶表达有关，进一步探明了中药减肥的作用机制，为今后减肥药物的研发提供方法和依据。