烟粉虱是一种广泛存在的害虫,Wolbachia是烟粉虱体内一重要的次生共生菌。目前的研究发现不同地区的不同烟粉虱种群Wolbachia的感染情况是存在明显差异的,而关于影响烟粉虱Wolbachia感染情况的因子还不是很清楚。本次研究利用巢氏PCR方法检测了中国东南部25个地理种群1161头烟粉虱的Wolbachia感染情况。发现所采集烟粉虱各种群的Wolbachia感染率范围由1.54%到66.67%。不同类型隐种烟粉虱之间和不同地理位置的烟粉虱种群之间存在显著性差异。而不同寄主植物上烟粉虱种群Wolbachia感染情况没有显著差异,并且雌雄虫Wolbachia感染率相近。研究结果显示我国地区烟粉虱Wolbachia感染的多样性,另外巢氏PCR的应用扩展了对烟粉虱Wolbachia感染情况的认识。研究结果如下：1.烟粉虱共生菌Wolbachia分子检测技术的选取通过比较使用3种常用的以Wolbachia表面蛋白基因(wsp)和16S rDNA为靶标基因的常规PCR,其中除了用通用引物扩增Wolbachia表面蛋白基因(wsp)和16SrDNA外,另一种是参考李正西等(2007)用特异性引物扩增16SrDNA来检测烟粉虱Wolbachia。发现用以上3种常用的PCR技术,在检测烟粉虱Wolbachia时候会有假阳性或是假阴性存在。最终选择巢氏PCR来检测烟粉虱体内的Wolbachia。以烟粉虱Wolbachia表面蛋白基因(wsp)的目的基因,利用primer 5软件设计一对特异性引物,发现巢氏PCR在检测烟粉虱Wolbachia时更加灵敏,准确。2.烟粉虱田间种群Wolbachia感染情况与宿主隐种、寄主植物、性别等的关系分别采集了中国东南部江苏省和浙江省两个省份的25个田间烟粉虱种群。采集到13种寄主植物上的1161头烟粉虱成虫。测定烟粉虱隐种类型以及不同雌雄虫的Wolbachia感染情况。并分别比较了烟粉虱田间种群Wolbachia感染情况与宿主隐种、寄主植物、性别和地理位置之间的关系,进行不同因子下的差异显著性分析。最终得出烟粉虱田间种群Wolbachia感染情况与宿主隐种、地理位置是存在关系的。在不同寄主植物、雌雄成虫之间没有显著性差异。3.烟粉虱田间种群Wolbachia系统发育分析根据测序结果,用wsp基因的特异性引物,从所检测的25个烟粉虱自然种群中扩增出Wolbachia的wsp基因片段,长度为500 bp。经过分析比对,在烟粉虱自然种群内总共感染了六种Wolbachia株系,我们将其命名为：wBtabYZ1(KJ648498)、 wBtabHZ2 (KJ648499)、wBtabNJ3 (KJ648500)、wBtabNJ4(KJ648501)、wBtabJH5 (KJ648502)和wBtabYC6 (KJ648503)。六种株系的Wolbachia在烟粉虱自然种群中分布如下,wBtabYZl和wBtabHZ2株系分布最广,在25个种群中都有分布,而wBtabNJ3和wBtabNJ4株系只在南京实验室种群中出现。wBtabJH5和、vBtabYC6分别存在于金华和盐城地理种群中。系统发育分析结果显示,田间自然种群中Wolbachia的wsp基因同源性很高,并且与其他物种如白背飞虱、库蚊、褐飞虱和三叶斑潜蝇的亲缘关系很近。