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背景目前,肺癌的发病率在全世界各国都是排在首位,特别是随着当前环境的恶化和城市化的不断推进,肺癌已经成为危害人们健康的头号恶性肿瘤杀手。临床上,虽然检测肺癌手段多样,但是最终确诊肺癌还是需要病理活检,并且取活检组织也可以通过纤维支气管镜、痰细胞和肺穿刺等多种方法。不过这些确诊的手段都是侵入性手段,对一些有其他并发症的患者也难以施行,并且大部分确诊的肺癌患者已经进入到了晚期阶段甚至发生了转移。因为早期肺癌症状并不明显,这些复杂和侵入性的确诊手段无法运用到早期的肺癌筛查。正是因为缺乏有效的早期筛查手段,肺癌的五年生存率较低。在医学水平较高的西方发达国家,肺癌的五年生存率因为较为完善的早期筛查而较高;但是在发展中国家,特别是非洲国家,肺癌的五年存活率甚至不到5%。虽然各种检查技术得到了发展和进步,但是诊断手段的多样化和先进化却难以进一步提高肺癌的五年生存率。并且肺癌的治疗手段已难以取得突破性进展,因此进一步挖掘肺癌的早期筛查技术是当前科研和临床工作者的使命和任务。近来表观遗传学成为当前研究的一个热门话题,表观遗传学是可以参与肿瘤从早期到晚期整个发展过程,而DNA甲基化是表观遗传学最重要的修饰方式之一,在许多恶性肿瘤中例如胃癌、乳腺癌、肝癌、前列腺癌、膀胱癌和肺癌等中均检测到DNA甲基化,而这些甲基化主要发生于基因启动子区的CpG岛位点[1]。相比其他位点,CpG岛位点的异常甲基化往往会引起抑癌基因的转录失活,进而引起肿瘤的产生,这已经通过研究许多抑癌基因得到了证实。虽然在研究肺癌甲基化方面,许多抑癌基因的作用机制已经基本研究透彻,但是本实验综合选择了p16（multiple tumor suppressor 1,MTS）、死亡相关蛋白激酶（deat h-associated protein kinase,DAPK）和结肠腺瘤样息肉蛋白（adenomatos is polyposis coli,APC）基因这三个基因,主要原因是这三个基因在肺癌的早期阶段就已经参与其中,在相关途径中起着关键作用。通过分析这三个基因启动子区甲基化在肺癌中的作用机制,进而能够为肺癌的早期诊断和肺癌的预测提供新的有效手段。目的:本研究旨在通过检测肺癌患者外周血中p16、DAPK和APC基因启动子异常甲基化并分析其在肺癌早期诊断中的价值。方法:1.研究对象:选择2016年10月至2017年8月期间在广西医科大学第一附属医院就诊,行手术治疗并术后经本院病理科检测确诊为非小细胞肺癌的患者79例,所有患者均未经过放疗和化疗等治疗。同时选择广西医科大学第一附属医院呼吸内科同年住院治疗的肺部非恶性肿瘤患者80例,均排除肺部或其他器官的恶性肿瘤病史。病例资料的收集均得到了受试者的同意和支持。2.DNA甲基化水平的检测:采用实时荧光定量PCR（Real-time Quanti tative PCR,qPCR）检测p16、DAPK和APC基因启动子的甲基化水平。3.实验数据分析和处理:分析软件使用SPSS17.0版本。对不符合正态分布的数据采用中位数和四分位间距进行描述。采用?2检验对定性资料进行比较分析。采用Mann-Whitney U检验对呈偏态分布的定量资料两独立样本之间进行比较。采用多因素非条件logistic回归方法分析肺癌与性别、年龄、吸烟、甲基化水平的危险相关性。采用受试者工作特征曲线（rece iver operating characteristics,ROC曲线）来比较p16、DAPK和APC基因甲基化水平对肺癌诊断的价值,以α=0.05为检验水准。结果:1.在年龄、性别、吸烟史之间对肺癌组和对照组进行比较,差异无统计学意义（P﹥0.05）;肺癌组和对照组p16、DAPK和APC基因的甲基化水平比较,差异具有统计学意义（P<0.05）;分析肺癌组p16、DAPK和APC基因启动子甲基化率与患者临床病理资料（年龄、性别、吸烟、组织学类型、有无淋巴结转移和病理分期）的关联,差异无统计学意义（P>0.05）。2.按百分位数法,将肺癌组和对照组的p16、DAPK和APC基因启动子甲基化水平分为4层,采用非条件logistic回归分析,结果显示p16、D APK和APC基因均是肺癌的危险因素,且随着基因甲基化水平的增加,患肺癌的危险性增加。3.比较检测单个基因和联合多个检测基因对肺癌的诊断价值。单个基因对肺癌诊断价值从高到低依次为DAPK（AUC=0.790）、p16（AUC=0.787）、APC（AUC=0.746）。相比单个基因检测,联合3个基因对肺癌诊断价值更高,灵敏度明显上升,特异度有所下降。结论:1.外周血p16、DAPK和APC基因启动子甲基化与肺癌有关,对比不同年龄、不同性别、有无吸烟史、不同的组织学类型、不同的病理分期和有无淋巴结转移的肺癌患者p16、DAPK和APC基因启动子甲基化水平之间无显著差异。2.p16、DAPK和APC基因均是肺癌的危险因素,并且随着启动子甲基化水平增加,患肺癌的危险增加。3.联合检测p16、DAPK和APC基因启动子甲基化水平对肺癌的诊断价值相比单个检测更高,因此采用荧光定量PCR对p16、DAPK和APC基因启动子甲基化水平的检测有助于肺癌的早期诊断。