论文部分内容阅读
背景：树突状细胞(dendritic cells,DCs)能够高效处理、加工和提呈抗原,是功能最强的抗原提呈细胞。DCs能够将抗原提呈给T淋巴细胞和B淋巴细胞,激活淋巴细胞,从而能够诱发一系列免疫应答,在机体细胞免疫应答中扮演起动者的角色。细菌脂多糖(Lipopolysaccharides, LPS)是革兰氏阴性细菌细胞壁的主要成分,能够诱导细胞产生炎症反应。TNF-α能在机体炎症阶段分泌,明显促进T细胞的增殖,增强其杀伤作用。IL-6的大量表达,能减弱中性粒细胞的吞噬能力,加剧炎症介质的产生,从而能进一步加快炎症反应进程。当炎症反应发生时,LPS与细胞表面CD14发生特异性结合,促进大量炎症因子的分泌,从而介导一系列生物学反应。白细胞介素37(interleukin-37,IL-37)是目前唯一没有发现鼠同系物的IL-1家族成员。在骨髓、肝脏、胸腺、肺等组织中均能检测到IL-37的表达。IL-37参与多种炎症性疾病和免疫性疾病的发生发展。在自然杀伤细胞和单核细胞中,IL-37与IL-18BP结合后,能够与IL-18Rβ形成复合物,抑制IL-18的活性,从而抑制炎症因子IFN-γ的产生。然而IL-37对DCs作用及其在免疫及感染性疾病中的作用机制还不明确。IL-37对DCs炎症因子表达及其在炎症中的作用的影响还有待进一步探讨。目的：探讨IL-37对LPS诱导的B6小鼠骨髓细胞诱导的树突状细胞(dendritic cells,DCs)分泌炎症因子的调节。方法：取小鼠骨髓细胞,诱导其分化为DCs,用IL-37处理后分别用LPS刺激,流式细胞仪检测细胞表面共刺激分子(CD80、CD86),RT-PCR法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素la(IL-la)mRNA的表达,多重液相蛋白定量CBA试剂盒检测细胞上清中IL-1α、IL-6、TNF-α蛋白的表达。结果：磁珠分选分离高纯度的DCs,能够满足本实验的要求。IL-37能够减少LPS诱导的DCs表面共刺激分子CD80、CD86的表达,并抑制DCs分泌IL-1α、IL-6、TNF-α。结论：IL-37可以抑制DC细胞炎症因子的分泌,调节细胞炎症因子网络的平衡,具有一定的抗炎作用,从而抑制免疫反应。背景：树突状细胞(DC)在人体大多数组织中均能检测到,是一种数量化较少的细胞群体,约占各狙织总细胞的0.1到2%不等。DC是专职抗原提呈细胞(antigen presenting cells,APC),能够通过捕获,处理,提呈抗原和激活幼稚T细胞,在活化免疫反应中发挥重要的作用。在稳态条件下,DC能保持未成熟的状态,而当有炎症信号刺激时,未成熟的DC能够被激活。活化的DC能够上调共刺激分子如CD80,CD86和CD40,从而促进T细胞的活化和扩展[2-4]。白细胞介素(IL)-1家族的细胞因子在多种免疫性炎症反应和自身免疫性疾病中发挥重要作用[5,6]。同时IL-1家族是机体对抗病原微生物和物理损坏的第一道防线。IL-37是最近发现的IL-1家族的新成员,是固有免疫系统的一个基本的抑制剂。正能够表达于多种正常组织和肿瘤组织中[7-10]。Kumar及其同事已经证实,IL-37蛋白能够在扁桃体,皮肤,食道,胎盘,黑色素瘤W及肺,前列腺,结肠和乳腺癌中表达,但是表达水平较俯化经过诱导的外周血单个核细胞(PBMC)和树突状细胞也能够表达IL-37[10]。尽管大量的文献对IL-37基因位点的测序进行了很多工作,但仍没有发现小鼠同源的IL-37的表达。IL-37在抑制免疫反应中发挥重要作用,具有调节树突状细胞功能的作用。然而,IL-37在细胞中发挥具体的机制尚不十分清楚。目的：研究IL-37对DC免疫表型和功能特点以及对CD4+和CD8+T细胞的影响,从而能够进一步说明IL-37在免疫性疾病中的作用。方法：取小鼠骨髓细胞,诱导其分化为DCs,用IL-37处理后,流式细胞仪检测细胞表面共刺激分子(CD80、CD86、CD40),RT-PCR法检测肿瘤坏死因子a(TNF-a)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素10(IL-10)、和转化生长因子β(TGF-β)的mRNA的表达,多重液相蛋白定量CBA试剂盒及ELISA试剂盒检测细胞上清中TNF-a、IL-6、IL-10和TGF-β蛋白的表达。流式细胞术及Western方法检测树突状细胞中磯酸化蛋白的表达。应用蛋白抑制剂后检测炎症因子的表达。将DC与T细胞共培养,流式细胞术检测T细胞増殖(CFSE)及活化程度(CD25和CD69)。结果：IL-37能够下调树突状细胞表面共刺激分子CD80和CD86的表达。与此同时,促炎因子TNF-a和IL-6的表达被明显抑制,而T细胞抑制因子TGF-P明显增高。IL-37预处理的树突状细胞明显降低T细胞的增殖和活化能力。IL-37能够降低树突状细胞中憐酸化ERK,NF-kB和S6K表达。IL-37处理的树突状细胞对CD4+T细胞和CD8+T细胞产生明显抑制作用。结论：IL-37能够通过影响ERK,NF-kB和S6K依赖的信号通路抑制DC的成熟和免疫反应,从而抑制T细胞的活化及增殖。