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第一部分 蛋白激酶-α，βⅠ，βⅡ在糖尿病肾病小鼠肾组织中的分布、表达及替米沙坦对其影响 论文1：蛋白激酶C-α在糖尿病肾病小鼠肾组织中的分布、表达及替米沙坦对其影响 目的：探讨蛋白激酶C-α（protein kinase C-α，PKC-α）在糖尿病肾病（Diabetic Nephropathy，DN）小鼠肾脏中的分布、表达，以及与肾小球内转化生长因子（transforming growth factor-β1，TGF-β1）和血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）的关系，同时观察替米沙坦对PKC-α表达的影响。 方法：实验分为正常组（NG组）、糖尿病肾病组（DN组）、治疗组（T组）。链脲佐菌素隔日腹腔注射诱导建立DN模型，T组用替米沙坦9mg-kg-1·d-1灌胃治疗，6周后检测各组小鼠血糖、24小时尿蛋白量、肾小球总细胞数、右肾重量、体重、右肾重指数、肾小球面积和周长。用激光共聚焦技术对PKC-α在足突细胞、近曲小管上皮细胞、髓袢升支粗段和集合管上的表达进行定位。免疫印迹分别检测各组肾皮质、外髓和内髓PKC-α的蛋白表达。免疫荧光检测各组肾小球PKC-α、TGF-β1、VEGF表达量。 结果：（1）与NG组小鼠相比，DN组小鼠血糖、24小时尿蛋白量、肾小球总细胞数及单个核细胞数、右肾重量、体重、右肾重指数、肾小球面积和周长均明显升高，T组小鼠上述各项指标均较DN组减少。（2）与NG组小鼠一致，DN组小鼠PKC-α分布于肾小球系膜区、足突细胞和近曲小管上皮细胞、皮质集合管间介细胞以及髓质集合管主细胞。但DN小鼠近曲小管上皮细胞PKC-α的分布发生转位变化，在腔膜侧表达。与DN组相比，T组小鼠近曲小管上皮细胞腔膜侧PKC-α的表达减弱。（3）与NG组相比，DN组小鼠肾小球PKC-α、TGF-β1、VEGF表达量升高，T组小鼠上述指标的表达量较DN组下降。PKC-α与VEGF的变化呈正相关（r=0.742，P=0.024），与TGF-β1的变化不相关（r=0.287，P=0.085）。（4）PKC-α在DN小鼠的肾皮质和外髓的表达量显著高于NG组，而T组的表达量显著低于DN组。各组PKC-α在内髓的表达量无明显差异。 结论：（1）DN肾组织中PKC-α的分布和表达较NG组发生改变，PKC-α可能参与DN近曲小管功能改变并通过影响肾小球VEGF的表达参与DN尿蛋白的形成。（2）替米沙坦可通过降低PKC-α表达来实现其对DN小鼠肾脏的保护作用，提示肾素-血管紧张素系统（renin-angiotensin system，RAS）通过影响PKC-α转导途径的异常参与DN的发生、发展。论文2：PKC-βⅠ，βⅡ在糖尿病肾病小鼠肾组织中的分布、表达及替米沙坦对其影响 目的：探讨蛋白激酶C-βⅠ（Protein Kinase C-βⅠ，PKC-βⅠ）、PKC-βⅡ在糖尿病肾病（Diabetic Nephropathy，DN）小鼠肾脏中的分布、表达特点，及其与肾小球内转化生长因子（transforming growth factor-β1，TGF-β1）和血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）的关系，同时观察替米沙坦对PKC-βⅠ，βⅡ表达的影响。 方法：实验分为正常组（NG组）、糖尿病肾病组（DN组）、治疗组（T组）。链脲佐菌素隔日腹腔注射诱导建立DN模型，T组用替米沙坦9mg·kg-1·d-1灌胃治疗，6周后用激光共聚焦技术对PKC-βⅠ，βⅡ在足突细胞、近曲小管上皮细胞、髓袢升支粗段和集合管上的表达定位。免疫杂交检测各组肾皮质、外髓及内髓PKC-βⅠ，βⅡ的蛋白表达。免疫荧光法检测各组肾小球PKC-βⅠ，βⅡ、TGF-β1、VEGF表达量。 结果：（1）与NG组一致，DN组小鼠PKC-βⅠ分布在肾小球足突细胞、近曲小管上皮细胞、皮质和髓质的髓袢升支粗段、皮质集合管间介细胞和髓质集合管主细胞。但在近曲小管上皮细胞腔膜侧的表达DN组小鼠明显增强，T组小鼠明显减弱。（2）DN组小鼠PKC-βⅡ分布在肾小球足突细胞、近曲小管上皮细胞腔膜侧、皮质和髓质的间质细胞。与NG组相比，DN组小鼠的近曲小管上皮细胞腔膜侧出现表达，皮质和内髓集合管的表达消失。与DN组相比，T组小鼠近曲小管上皮细胞腔膜侧PKC-βⅡ的表达消失，内髓集合管有表达。（3）与NG组相比，DN组小鼠肾小球内PKC-βⅠ、TGF-βⅠ、VEGF表达量升高，PKC-βⅡ表达量降低。T组小鼠肾小球内PKC-βⅠ、TGF-β1、VEGF表达量均较DN组降低，PKC-βⅡ表达量与DN组无差异。PKC-βⅠ的表达与TGF-β1的变化呈正相关（r=0.629，P=0.034），与VEGF变化无关（r=0.387，P=0.079）；PKC-βⅡ的表达与TGF-β1（r=0.287，P=0.085）和VEGF（r=0.341，P=0.082）变化无关。（4）PKC-βⅠ在DN组小鼠肾皮质和外髓的表达增强，在T组的表达比DN组显著下降。各组PKC-βⅠ在内髓的表达无明显变化。（5）PKC-βⅡ在DN组小鼠肾皮质的表达下降，在T组表达比DN组显著增加。各组PKC-βⅡ在髓质的表达量无明显变化。结论：（1）DN时PKC-βⅠ和PKC-βⅡ分布和表达发生了改变；（2）PKC-βⅠ能通过影响肾小球TGF-β1的表达参与DN肾小球的肥大；（3）PKC-βⅠ和PKC-βⅡ参与了DN近曲小管功能的改变，PKC-βⅡ参与了DN小鼠集合管损害的发病过程；（4）RAS的活性增加是PKC-βⅠ和PKC-βⅡ活性改变的重要原因，替米沙坦可通过改变PKC-βⅠ和PKC-βⅡ的表达来实现其对DN小鼠肾脏的保护作用。 第二部分 蛋白激酶C-α，βⅠ，βⅡ在糖尿病肾病患者肾小球中的表达及意义 目的：探讨蛋白激酶C-α（protein kinase C-α，PKC-α）、PKC-βⅠ、PKC-βⅡ在正常人以及糖尿病肾病（diabetic nephropathy，DN）患者肾小球中的表达特点及其与转化生长因子（transforming growth factor-β1，TGF-β1）和血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）的关系。 方法：取正常以及DN患者活检肾组织，采用PAS染色判定肾小球细胞外基质（extracellular matrix，ECM）扩张程度。半定量免疫组织化学法检测PKC-α，βⅠ，βⅡ、TGF-β1、VEGF在肾小球中的表达情况。 结果：（1）PKC-α，βⅠ，βⅡ在正常人肾小球中均有表达。（2）DN患者肾小球中PKC-α，βⅠ、TGF-β1和VEGF的表达明显增强而PKC βⅡ的表达明显减弱，且肾小球ECM明显增加。其中PKC-α与VEGF的表达变化呈正相关（r=0.600，P=0.039），PKC-βⅠ与TGF-β1的表达变化呈正相关（r=0.521，P=0.043）。 结论：（1）PKC-α，βⅠ，βⅡ在正常人以及DN患者。肾小球中的表达不同。（2）PKC-α可能通过增强肾小球内VEGF的表达参与DN蛋白尿的发生，PKC-βⅠ可能通过增强肾小球内TGF-β1的表达和ECM的扩张参与DN肾小球肥大的发生，而DN患者肾小球内PKCβⅡ表达下降可能是机体对高糖的保护性反应。