【摘 要】
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实验目的:间充质干细胞作为胶质瘤微环境中重要的组成部分,在胶质瘤的发展侵袭过程中起到了重要的作用。最近研究表明人脑胶质瘤相关的间充质干细胞存在特殊的情况下与血管周细胞转化的作用关系,从而促进胶质瘤的血管生成。然而,其生物特性以及相关分子机制和信号通路尚未被完全了解,因此,我们使用特定条件来模拟胶质瘤微环境,从而研究间充质干细胞在肿瘤发展过程中的机制。实验方法:从人脑胶质瘤标本中提取相关间充质干细胞
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实验目的:间充质干细胞作为胶质瘤微环境中重要的组成部分,在胶质瘤的发展侵袭过程中起到了重要的作用。最近研究表明人脑胶质瘤相关的间充质干细胞存在特殊的情况下与血管周细胞转化的作用关系,从而促进胶质瘤的血管生成。然而,其生物特性以及相关分子机制和信号通路尚未被完全了解,因此,我们使用特定条件来模拟胶质瘤微环境,从而研究间充质干细胞在肿瘤发展过程中的机制。实验方法:从人脑胶质瘤标本中提取相关间充质干细胞。体外实验:采用不同条件培养基和transwell共培养分别处理间充质干细胞;采用基因芯片技术检测不同条件培养情况下的间充质干细胞m RNA和lnc RNA的表达情况,然后进行靶基因预测和通路富集分析;利用免疫组化和免疫荧光检测人脑胶质瘤标本对应基因表达量;利用病毒载体转染间充质干细胞敲低靶基因,利用CCK-8检测转染后细胞活力;采用western-blot技术检测不同处理后间充质干细胞靶基因表达量;采用血管生成实验检测不同处理间充质干细胞血管生成能力。体外实验:将胶质瘤细胞系U87与人脑胶质瘤相关间充质干细胞混匀接种到4-6周裸鼠颅内,记录裸鼠的生存情况,28天后取下肿瘤组织,利用免疫组化检测肿瘤组织靶基因表达水平。实验结果:人脑胶质瘤相关间充质干细胞在条件培养基与transwell共培养处理后,均发生形态学改变。基因芯片检测不同处理后间充质干细胞发现与血管生成相关靶基因PDCL3表达量显著增高,western-blot检测PDCL3表达量显著增高,且通路富集分析后发现其参与VEGF/VEGFR-2信号通路的表达。免疫组化与免疫荧光检测人脑胶质瘤标本发现在血管附近,PDCL3和VEGFR-2表达量增高且与人脑胶质瘤相关间充质干细胞转化相关周细胞标记物α-SMA和血管内皮细胞标记物CD31表达量也增高。病毒转染后采用荧光显微镜检测GFP标签高表达,western-blot检测PDCL3表达量降低且VEGFR-2的表达量随之降低。血管形成实验显示,敲低PDCL3后,间充质干细胞成管能力相比对照组明显减弱,在0%gb-CM中更为明显。体外实验,小鼠脑组织免疫组化染色示PDCL3与VEGFR-2在管腔周围高表达。实验结论:在胶质瘤微环境中,人脑胶质瘤相关间充质干细胞中PDCL3基因表达量增高,影响下游VEGF/VEGFR-2通路的表达,从而促进血管生成。敲低PDCL3表达量后,间充质干细胞成管能力明显减弱,血管生成能力得到抑制。
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