研究背景:肝移植作为治疗终末期肝病的首选方法,近年来越来越面对着捐献器官短缺的困境,因此扩大供肝应用标准,将边缘供肝应用在肝移植手术中的方式逐渐被人们所接受。但是相比理想供肝来说,边缘供肝更容易受到缺血再灌注损伤的影响,通过各种方式减少缺血再灌注损伤对于边缘供肝移植后功能的恢复具有重要意义。Micro RNA作为长度约22个核苷酸的非编码单链RNA,在生物体体内起到重要的调节作用,在多项生命活动中均需要其参与,缺血再灌注损伤的过程也不例外。Mir-181a已被证实在脑组织及眼的缺血再灌注损伤中起到重要的调控作用,其在肝脏缺血再灌注损伤中扮演的角色需要进一步探索。研究目的:探讨mir-181a在肝脏缺血再灌注损伤过程中是否存在表达差异,以及对其可能的机制进行初步研究。研究方法:使用C57BL/6J小鼠构建小鼠缺血再灌注损伤模型,使用AML12及MIHA细胞系构建细胞缺糖缺氧-复糖复氧模型,PCR检测模型中各时间点mir-181a表达变化情况。使用Targetscan、mi RDB、mi RWalk数据库预测mir-181a的靶基因。通过在线网站Hiplot及软件Cytoscape的Clue Go模块对靶基因进行GO/KEGG富集分析,通过软件Cytoscape预测靶基因可能的蛋白互作网络并通过MCODE模块分析其关键子网络。通过mir-181a-mimics及mir-181a-inhibitor干扰细胞中mir-181a的表达水平后构建缺糖缺氧-复糖复氧模型,通过检测Caspase-3,Cleaved Caspase-3,Ki67,PCNA的蛋白水平分析mir-181a在细胞缺糖缺氧-复糖复氧过程中对细胞凋亡及增殖的影响。结果:通过构建小鼠肝脏缺血再灌注损伤模型并通过PCR检测mir-181a表达变化情况随再灌注时间的变化,发现mir-181a在恢复灌注6小时时表达明显升高;在细胞缺糖缺氧-复糖复氧模型中,AML12及MIHA细胞系均在缺糖缺氧6小时,复糖复氧2小时时mir-181a表达最显著。通过对Targetscan、mi RDB、mi RWalk数据库结果取交集,可获得238个靶基因,对其进行GO富集分析,共有41个通路P值小于0.05,其中16个通路相较于其他功能接近的通路更有显著性;对靶基因进行KEGG富集分析显示,mir-181a主要涉及的生命活动有MAPK signaling pathway（丝裂原活化蛋白激酶信号通路）、Longevity regulating pathway-multiple species（长寿调节途径-多物种）、Renal cell carcinoma（肾细胞癌）、Rap1 signaling pathway（Rap1信号通路）、Insulin resistance（胰岛素抵抗）、Colorectal cancer（结直肠癌）、Longevity regulating pathway（长寿调节途径）等。mir-181a对靶基因的蛋白互作网络分析显示,99个靶基因与其他靶基因之间存在着相互作用关系,其中最为关键的子网络为LONRF1、WSB1、KLHL2、KLHL5、RNF6、CBLB、RNF182、UBE3C、CUL3之间存在的具有36种相互作用关系的子网络。通过调控mir-181a在体外培养的细胞系中的水平,在缺糖缺氧6小时后予以复糖复氧2小时,通过蛋白印迹实验的方式检测凋亡与增殖相关蛋白,可见mir-181a体外培养的细胞缺糖缺氧复糖复氧过程中,起到促进细胞凋亡而抑制其增殖的作用。结论:在动物体内及体外培养的细胞中,mir-181a在肝脏缺血再灌注损伤过程中均存在表达变化,通过对众多基因及通路的靶向调控,起到促进肝细胞凋亡而抑制其增殖的作用。