牛病毒性腹泻病毒（Bovine viral diarrhea virus，BVDV）与猪瘟病毒(Classical swine fever virus，CSFV)，绵羊边界病毒(Border disease virus，BDV)等同属于黄病毒科(Flaviviridae)瘟病毒属(Pestivirus)成员，在血清上有交叉反应。该病毒感染能引起牛病毒性—粘膜病(BVD-MD)，免疫耐受，孕牛流产或胎儿畸形等。BVDV除了感染牛以外，还可以感染猪、羊、骆驼等40多种动物，并引起发病。持续性感染(Persistant infection，PI)的牛终生带毒、排毒，促进了本病毒的传播。BVDV给养牛业带来了巨大经济损失，根据病毒感染细胞能否产生细胞病变将BVDV分成致细胞病变型BVDV(Cytopathic BVDV，CP-BVDV)和非致细胞病变型BVDV(Noncytopathic BVDV，NCP-BVDV)，PI牛主要是由于NCP-BVDV感染所致。　　BVDV防控依赖于有效的快速诊断方法进行监测，安全高效的疫苗进行预防和有效的抗病毒药物进行治疗。目前我国仍然缺乏自主研发的BVDV快速检测技术，NCP-BVDV不能产生细胞病变，不能采用常规的方法测定病毒滴度，这极大限制了抗病毒药物的筛选。本研究的终极目标是建立BVDV抗原和/或抗体检测试纸，并建立针对NCP-BVDV的滴度测定方法而建立抗病毒药物筛选方法。　　本研究首先利用切向流过滤和琼脂糖凝胶分子筛Sepherose4Fast Flow对病毒NCP-BVDV进行纯化，通过免疫BALB/C小鼠制备了针对抗BVDV的单克隆抗体。获得5株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为9G6D6、14G5F2、19A3H8、28H11G4、31D11C11。免疫染色方法测得腹水抗体的效价分别为1.28×105、1.28×105、1.02×106、1.28×105、3.2×103。5株单克隆抗体的轻链亚型均为Kappa，重链均为lgG1。5株单抗均不与CSFV产生交叉反应。19A3H8具有中和反应活性，中和效价为1∶6400。试图用5株单抗进行抗原试纸条的制备，但效果均不理想。　　为了建立高效简单的用于NCP-BVDV抗病毒药物的筛选方法，本研究利用上述单抗，建立了免疫染色的方法。通过利用免疫染色方法和荧光定量PCR对两种已知抗BVDV药物Ribavirin、Ammonium Chloride进行试验，证明了免疫染色方法的有效性，另外利用该方法研究发现PLC抑制剂U73122也影响NCP-BVDV复制。　　为了制备具有生物学活性的BVDV Ems蛋白，我们采用两种策略:将N端部分氨基酸进行原核表达和对BVDV Ems全长进行真核表达。将BVDVN-末端Ems基因克隆到原核表达载体pET-28a上，构建pET-28a-N-Ems重组质粒，在BL21(DE3)pLysS细菌中，经IPTG诱导表达，蛋白以包涵体形式存在，经变复性后，作为抗原包板，ELISA检测，与BVDV阳性血清有较好的反应，说明原核表达的BVDVN-末端Ems有较好的生物学活性（反应原性）。将BVDV Ems和E2基因克隆连接到真核载体pEGFP-N1，构建真核表达重组质粒pEGFP-N1-Ems和pEGFP-N1-E2转染入293T细胞中，发现只有Ems能够成功表达。　　综上所述，本研究制备了针对BVDV的单克隆抗体，并建立了一种简单可靠的方法用于测定NCP-BVDV滴度及用于抗病毒药物筛选，易于在生产和科研中推广和应用。并且成功的原核表达出了BVDVN-末端Ems蛋白，以及真核表达出了BVDVEms蛋白。原核表达的抗原Ems片段具有生物学活性，对后续ELISA抗体检测试剂盒的研究奠定基础，Ems真核表达的成功为后续针对Ems的单克隆抗体的制备奠定基础。