纤维素降解菌群的纯化鉴定及其诱变育种

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秸秆的资源化利用已成为我国的研究热点,而选育高效及活性稳定的纤维素降解菌是影响纤维素物质应用的关键。本实验分为三部分对纤维素降解菌进行研究,包括纤维素降解菌的分离纯化、单菌株的诱变育种以及突变菌株的培养条件优化。首先,纤维素降解菌的分离纯化。从实验室前期驯化的纤维素降解菌群5号菌群中分离筛选出4株具有降解纤维素能力的菌株,命名为F1、F2、F3和F4,通过染色实验以及16SrDNA鉴定,四株菌分别是苏云金芽孢杆菌、生淀粉糖化酶产生菌、粪产碱菌和蜡样芽孢杆菌。其次,单菌株的诱变育种。本研究对分离筛选出的菌株F2进行物理单因素诱变——紫外线诱变,以及物理化学复合因素诱变——紫外线-氯化锂诱变。共长出菌落7280个左右,其中紫外线诱变后长出3510个左右,紫外线-氯化锂诱变后长出菌落3770个左右。经革兰氏碘液初筛共筛出154株正突变株,酶活力复筛筛出8株,通过酶活稳定性分析,最终确定一株由紫外线-氯化锂诱变产生的稳定性较好的菌株——69号菌株,其酶活力值为0.31mg/ml,为出发菌株的1.4倍。最后,突变菌株培养条件优化。通过分别测定最佳氮源、碳源含量、氮源含量,以及碳源和氮源、温度的正交试验,确定了本试验诱变菌株69号的最佳培养条件。优化后的产酶活力达到0.081mg/mL是出发菌株的3.7倍。69号诱变株的最佳培养条件如下:培养基是Na2HPO43.0g,MgSO4-7H2O0.5g, CaCl20.5g, FeSO4-7H2O7.5mg, MnSO4-H2O2.5mg, ZnSO42.0mg,蒸馏水1000mL,2%80目秸秆粉,1%的硫酸铵,pH自然。在35℃下,水浴摇床150r/min的条件下培养4d。本实验研究,为纤维素降解菌的分离纯化以及对纤维素降解菌进一步选育开发奠定了实验基础和理论基础。
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