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目的:1.观察小檗碱(Berberine)对3T3-L1脂肪细胞炎症因子,如肿瘤坏死因子-α(TNF-a)和白细胞介素-6(IL-6),mRNA表达水平的影响。2.观察小檗碱对3T3-L1脂肪细胞脂肪因子,如瘦素(leptin)、脂联素(adiponectin)和内脂素(visfatin), mRNA表达水平的影响。3.观察小檗碱对3T3-L1脂肪细胞脂肪酸代谢相关酶和蛋白,如脂肪酸合酶(fatty-acid synthase, FAS)、乙酰辅酶A羧化酶(acetyl-CoA carboxylase, ACC)、脂肪组织甘油三酯水解酶(adipose triglyceride lipase, ATGL)和脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白(adipocyte fatty acid binding protein, AFABP/aP2), mRNA表达水平的影响。方法:以分化成熟的3T3-L1脂肪细胞为研究对象,分组及处理方法如下:1.小檗碱剂量组:分为空白组、Oμmol/L(对照组)、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L和40μmol/L的小檗碱组;2.小檗碱时间组:分为空白组、对照组和10μmol/L小檗碱干预4、8、24、48小时组;处理完之后提取上述各组脂肪细胞的总RNA,采用实时定量逆转录聚合酶链反应(quantitative real time polymerase chain reaction; qRT-PCR)检测各组脂肪细胞炎症因子(TNF-a和IL-6)、脂肪因子(瘦素、脂联素和内脂素)和脂肪酸代谢相关酶和蛋白(FAS、ACC、ATGL和AFABP) mRNA水平。结果:1.小檗碱对3T3-L1脂肪细胞炎症因子TNF-α和IL-6mRNA水平的影响不同剂量小檗碱处理组的TNF-α mRNA的水平有显著性差异(F=61.819,P<0.001),小檗碱浓度在5-20μmol/L之间呈剂量依赖形式降低脂肪细胞TNF-α mRNA的水平;不同作用时间小檗碱处理的脂肪细胞TNF-α mRNA的水平有显著性差异(F=106.767,P<0.001),呈时间依赖形式降低脂肪细胞TNF-α mRNA的水平。不同剂量小檗碱处理组的IL-6mRNA的水平有显著性差异(F=111.505,P<0.001),小檗碱浓度在5-20μmol/L之间呈剂量依赖形式降低脂肪细胞IL-6mRNA的水平;不同作用时间小檗碱处理的脂肪细胞IL-6mRNA的水平有显著性差异(F=65.528,P<0.001),呈时间依赖形式降低脂肪细胞IL-6mRNA的水平。2.小檗碱对3T3-L1脂肪细胞脂肪因子瘦素、脂联素和内脂素的mRNA水平的影响不同剂量小檗碱处理组的瘦素的(?)nRNA水平有显著性差异(F=181.846,P<0.001),小檗碱浓度在5-20μmol/L之间呈剂量依赖形式降低脂肪细胞瘦素mRNA的水平;不同作用时间小檗碱处理的脂肪细胞瘦素mRNA的水平有显著性差异(F=39.065,P<0.001),呈时间依赖形式降低脂肪细胞瘦素mRNA的水平。不同剂量小檗碱处理组脂联素的mRNA水平无显著性差异(P>0.05);不同时间小檗碱处理组脂联素的mRNA水平有显著性差异(F=4.323,P=0.018),10μmol/L小檗碱作用48小时显著降低脂肪细胞脂联素的(?)mRNA水平。不同剂量小檗碱处理组的内脂素的mRNA水平有显著性差异(F=170.723,P<0.001),小檗碱浓度在10-20μmol/L之间呈剂量依赖形式升高脂肪细胞内脂素mRNA的水平;不同作用时间小檗碱处理的脂肪细胞内脂素mRNA的水平有显著性差异(F=24.451,P<0.001),呈时间依赖形式升高脂肪细胞内脂素(?)nRNA的水平。3.小檗碱对3T3-L1脂肪细胞脂肪代谢酶FAS、ACC、ATGL和AFABP mRNA水平的影响不同剂量小檗碱处理组的FAS mRNA的水平有显著性差异(F=73.369,P<0.001),小檗碱浓度在5-20μmol/L之间呈剂量依赖形式降低脂肪细胞FAS mRNA的水平;不同作用时间小檗碱处理的脂肪细胞FAS mRNA的水平有显著性差异(F=78.562,P<0.001),10μmol/L小檗碱作用24小时显著降低脂肪细胞FAS mRNA的水平。不同剂量小檗碱处理组和不同作用时间小檗碱处理的脂肪细胞ACC mRNA均无显著性差异,P>0.05。不同剂量小檗碱处理组的ATGL mRNA的水平有显著性差异(F=14.834,P<0.001),小檗碱浓度在5-20μmol/L之间呈剂量依赖形式降低脂肪细胞ATGL mRNA的水平;不同作用时间小檗碱处理的脂肪细胞ATGL mRNA的水平有显著性差异(F=20.761,P<0.001),10μmol/L小檗碱作用8小时显著降低脂肪细胞ATGL mRNA的水平。不同剂量小檗碱处理组的AFABP mRNA的水平有显著性差异(F=11.693,P<0.001),小檗碱浓度在10-20μmol/L之间呈剂量依赖形式降低脂肪细胞AFABP mRNA的水平;不同作用时间小檗碱处理的脂肪细胞AFABP mRNA的水平有显著性差异(F=13.096,P<0.001),10μmol/L小檗碱作用4小时显著降低脂肪细胞AFABP mRNA的水平。结论:1.小檗碱在一定浓度时间范围内可以改善3T3-L1脂肪细胞的炎症状态。2.小檗碱在一定浓度时间范围内可以调节3T3-L1脂肪细胞脂肪因子的水平。3.小檗碱在一定浓度时间范围内可以抑制3T3-L1脂肪细胞脂肪酸形成及甘油三酯的水解。4.通过以上体外实验结果,我们推断小檗碱可能通过改善脂肪细胞炎症状态、调节脂肪因子的水平以及脂肪酸代谢来改善胰岛素抵抗。