基于树突状细胞的多功能人工抗原提呈细胞的构建与应用

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构建高效的人工抗原提呈细胞(artificial antigen presenting cells,aAPC)是肿瘤过继性细胞转移治疗的基础。aAPC模拟树突状细胞(dendritic cell,DC)向T细胞提呈抗原的行为,将抗原识别和共刺激因子这两类信号分子偶联到细胞或非细胞载体表面,起到体外活化T细胞的作用。随后大量扩增的T细胞被输入到肿瘤患者体内,实现肿瘤的特异性杀伤。选择细胞作为aAPC的载体,可以最大程度还原抗原提呈过程,但细胞系的选择存在诸多限制,目前可用的细胞载体存在生物安全性差、抗原分子装载困难、刺激分子数量有限等不足。基于微纳材料的aAPC可以一定程度上解决这些问题,但材料较小的尺寸一方面不利于抗原提呈,另一方面由于难靶向、易清除,使其难以在活体应用。此外,许多材料的刚性表面不利于T细胞活化过程中表面配体的流动重排,也会影响T细胞的活化。针对上述情况,本论文构建了一个基于树突状细胞的人工抗原提呈细胞体系。通过细胞的代谢合成对细胞膜上的胆碱分子进行叠氮基衍生,利用叠氮-环炔的生物正交反应将炔基化修饰的刺激分子大量共价偶联到DC表面。同时借助四氧化三铁纳米团簇的摄取对DC进行刺激,诱导树突状细胞成熟。结合上述两条策略即构建得到基于树突状细胞的多功能人工抗原提呈细胞。结果表明,DC对铁纳米团簇的摄取能够成功诱导细胞成熟表型的表达及细胞因子IL-12p70的分泌。通过细胞膜的叠氮基衍生和化学偶联,细胞表面装载大量刺激信号,提高了体外实验中该aAPC对T细胞的增殖、活化效果。此外,超顺磁性铁颗粒的内吞一方面上调趋化因子受体CCR7表达,另一方面使DC受到外加磁场操纵,增强了该人工抗原提呈细胞在体内靶向局部淋巴结的能力。最后,摄取了铁颗粒的aAPC被用来进行活体的核磁共振成像,观察到在外加磁场作用下该体系在淋巴结处能够更有效地聚集。利用DC作为载体,该体系解决了细胞型aAPC的安全性问题,同时能像微纳材料载体一样对刺激分子进行大量偶联;借助DC活化成熟的生物学过程提高其他功能性刺激、趋化因子受体表达,进一步提高了促进T细胞活化的效果及活体靶向性;最后借助材料造影剂的特性,为aAPC体内示踪提供了可能。这些进一步拓展了该人工抗原提呈细胞在活体内的应用,使其有望成为肿瘤免疫治疗的有力工具。
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