第一部分结肠癌组织中整合素αvβ6和eIF4E的表达及临床意义研究背景整合素αvβ6和翻译起始因子eIF4E在结肠癌的恶性行为中发挥着重要的作用。近年来,蛋白质合成机制的失调控在肿瘤发生发展中的作用正成为越来越多研究者关注的热点,其中eIF4E在这一作用中居于核心地位。已报道,多种整合素亚型与涉及eIF4E的信号通路之间存在密切的联系,而整合素αvβ6与eIF4E之间潜在的具体作用机制仍不甚清楚。方法为探讨结肠癌组织中整合素αvβ6和eIF4E的蛋白表达及其临床意义,我们采用组织芯片-免疫组化SP法,检测138例结肠癌患者结肠癌组织及癌旁正常组织中整合素αvβ6和elF4E蛋白的表达,并分析两者表达的相关性及与结肠癌患者的临床病理特征之间的关系。结果结肠癌组织中整合素αvβ6和eIF4E蛋白的表达明显高于癌旁正常结肠组织,具有显著的统计学差异(P<0.05)。eIF4E表达与临床TNM分期有关(P=0.009),而整合素αvβ6表达与肿瘤T分期,M分期及临床TNM分期有关(分别为P=0.011,P=0.034,P=0.012)。Spearman等级相关分析表明结肠癌组织中eIF4E与整合素αvβ6蛋白的表达呈低度正相关(P<0.001,r=0.299)。结论整合素αvβ6和elF4E的表达与结肠癌患者的临床病理特征之间存在密切联系,且二者在结肠癌组织中的表达有一定的相关性。这一发现为进一步研究两者间可能存在的相互作用提供了一定的理论前提。αvβ6蛋白的表达呈低度正相关(P<0.001,r=0.299)。结论整合素αvβ6和elF4E的表达与结肠癌患者的临床病理特征之间存在密切联系,且二者在结肠癌组织中的表达有一定的相关性。这一发现为进一步研究两者间可能存在的相互作用提供了一定的理论前提。第二部分整合素avβ6在eIF4E的翻译作用下调控结肠癌的恶性进展研究背景整合素αvβ6在结肠癌的恶性进展中发挥着重要的作用,它可在EST-1的转录调控作用下促进p6的基因转录增加,进而影响结肠癌肿瘤细胞的多种生物学行为及恶性进展；然而在翻译水平上,整合素αvβ6蛋白合成的调控尚未有报道。在第一部分的研究中,我们发现整合素αvβ6和eIF4E在结肠癌组织中的表达存在一定的正相关；同时根据整合素p6的mRNA的结构特点,我们推测它的表达可能受eIF4E潜在的翻译调控。方法小于扰RNA作为基因沉默技术的一种手段。应用针对eIF4E的siRNA可以抑制SW480和HT-29结肠癌细胞中eIF4E的表达,用来探究eIF4E能否在翻译水平调控整合素β6的表达,并进一步观察eIF4E被敲除之后对结肠癌细胞多种恶性生物学行为产生的影响,该实验涉及siRNA技术,Western Blot, RT-PCR,细胞免疫荧光,细胞迁移(Transwell小室), CCK-8增殖与凋亡检测,流式仪检测凋亡等相关的实验技术和方法。结果Western Blotting及RT-PCR结果表明,针对于eIF4E的小干扰RNA可以显著地降低SW480和HT-29细胞系的各组细胞中eIF4E蛋白及mRNA的表达水平；进而,β6的蛋白表达受到明显抑制,而其mRNA的表达水平在eIF4E siRNA处理前后没有显著变化。更重要的是,在SW480和HT-29各组细胞中,当eIF4E被干扰表达之后,原高表达p6的细胞株表现为迁移能力受到明显抑制,并且对5-FU的凋亡耐受能力同样降低(P<0.05),其水平均下降到与低表达β6的细胞株相近的水平。结论整合素β6的表达受到eIF4E翻译水平的调控,进而可增加β6的蛋白合成,促进肿瘤细胞的迁移、生存、抗凋亡及化疗抵抗能力,因此最终导致了结肠癌肿瘤细胞的恶性进展。由此可知,针对eIF4E的靶向干扰可能为高表达整合素αvβ6的结肠癌患者提供潜在的有效治疗策略。