尼氏真绥螨性别决定相关基因的研究

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昆虫和高等动物都已发现参与个体发育的Sox与Dmrt基因家族,这两个基因家族在进化上高度保守。Dmrt基因家族与性别决定相关,该家族成员都含有一个具有DNA结合能力的保守基序―DM结构域,以锌指结构与特异DNA序列结合,在性别决定和分化发育的调控中担负着重要的功能。Sox家族成员的典型特征是编码的蛋白质都具有一个保守的基序HMG-box,可以与DNA序列特异性结合,促进基因的特异转录,从而在胚胎发育及性别分化中起着重要的调控作用。  本文采用简并PCR技术,对尼氏真绥螨Sox基因的保守序列和Dmrt基因的DM结构域进行了扩增、克隆和测序,并将序列与GenBank中其他物种的相应序列进行同源性比较;用Swiss-model软件模拟编码氨基酸三维结构,用MEGA4.0和ClustalW2等软件构建系统树和分析了不同物种间Sox基因的保守序列和Dmrt基因的DM结构域的进化关系。  从尼氏真绥螨筛选克隆到4个Dmrt基因家族成员的DM结构域,按通用命名法,根据尼氏真绥螨的拉丁名Euseiusnicholsi,分别命名为EnDmrt2a,EnDmrt2b,EnDmrt2c,EnDmrt2d,它们与人DmrtA1、DmrtA2、DmrtA2、DmrtA1保守区的核苷酸的相似性分别为77%、76%、77%、72%,与人DmrtA2氨基酸序列的一致性分别为95%,95%,95%,91%;它们与人DmrtA2编码的氨基酸三维模型间没有明显的变化;与人、猕猴、黄牛、鼠、褐牙鲆、太平洋牡蛎、大型蚤、果蝇、线虫等9个物种Dmrt基因DM结构域编码的氨基酸构建的分子进化树表明,EnDmrt2a、EnDmrt2b、EnDmrt2和大型蚤聚为一类,与人等其他动物的亲缘关系较远,EnDmrt2d与所有动物的亲缘关系都远。  从尼氏植绥螨克隆得到了Sox基因HMG-box克隆,命名为EnSox1a。EnSox1a的核苷酸序列及其编码氨基酸与其它无脊椎动物和脊椎动物物种的相似性分别达到74%-77%和85%-95%。与蜱、红原鸡、非洲爪蟾、文昌鱼、人、鼠、无肠虫、野猪、猫等9种动物Sox基因的HMG-box编码氨基酸序列构建的分子系统发育树表明,EnSox1a单独聚为一类,与其他物种的近缘关系较远。用EnSox1a、人Sox1和非洲爪蟾Sox2三者编码氨基酸序列建立的三维结构模型没有几乎没有差异,说明不同物种Sox基因HMG-box具有功能上的相似性。  本研究结果显示,在尼氏真绥螨基因组中存在着Sox和Dmrt基因家族的多个成员;与其他动物Sox和Dmrt基因的相似性及进化关系均显示,这两个基因家族在动物系统进化上既有明显分化,同时又具有高度的保守性。
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