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目的： 通过不同浓度葡萄糖和胰高血糖素（Glucagon, GC）处理MIN6细胞（胰岛β细胞系），并在添加蛋白激酶A（Protein kinase A, PKA）信号通路刺激剂异丙肾上腺素（Isoprenaline, ISO）前后检测PKA的变化及胰岛素的分泌，进一步探讨PKA在GC促进MIN6细胞胰岛素分泌中的作用。 方法： 1. 体外培养小鼠MIN6细胞并每天换液，当细胞生长到一定密度后传代用于实验； 2. 将细胞分成三组，分别加入0mmol/L（无糖）、2.8mmol/L（低糖）和16.7mmol/L（高糖）三个葡萄糖浓度，在此基础上分别设置0ng/L、500ng/L和1000ng/L三个浓度水平的GC进行干预，将对PKA表达敏感的AKR质粒及空白质粒PCDNA3.1用电穿孔转染法分别转入MIN6细胞，利用融合了生物传感器的荧光共振能量转移（Fluorescence resonance energy transfer, FRET）技术在添加刺激剂ISO前后实时定量检测各组细胞内PKA的变化； 3. 酶联免疫吸附剂测定法（Enzyme linked immunosorbent assay, ELISA）分别检测添加刺激剂 ISO前后不同处理组的细胞上清液中胰岛素的分泌量； 4. 收集数据并进行统计分析。 结果： 1. 基于FRET的生物传感器技术检测不同浓度葡萄糖环境下不同浓度GC干预对PKA的影响： ①无糖时：500ng/L GC阶段较空白处理和0ng/L GC阶段显著上升，1000ng/L GC阶段较空白处理和0ng/L GC阶段显著上升，ISO阶段较各阶段均显著上升（P<0.05）； ②低糖时：0ng/L GC阶段较空白处理阶段显著上升，500ng/L GC阶段较空白处理和0ng/L GC阶段显著上升，1000ng/L GC阶段较空白处理和0ng/L GC阶段显著上升，ISO阶段较各阶段均显著上升（P<0.05）； ③高糖时：0ng/L GC阶段较空白处理阶段显著上升，500ng/L GC阶段较空白处理和0ng/L GC阶段显著上升，1000ng/L GC阶段较空白处理和0ng/L GC阶段显著上升，ISO阶段较各阶段均显著上升（P<0.05）； ④不同浓度GC干预对PKA生成影响的比较：无糖组各浓度GC阶段之间无显著差异（P>0.05），低糖组和高糖组1000ng/L GC阶段均显著高于500ng/L GC阶段（P<0.05）； 2. ELISA检测不同浓度GC对各组细胞分泌胰岛素的影响： ①无ISO时：无糖1组中，1000ng/L GC干预后高于500、0ng/L时，500ng/L GC干预后高于0ng/L时（P<0.05）。低糖1组中，1000ng/L GC干预后高于500、0ng/L时，500ng/L GC高于0ng/L时（P<0.05）。高糖1组中，1000ng/L GC干预后高于500、0ng/L时，500ng/L GC干预后高于0ng/L时（P<0.05）； ②添加ISO后：无糖2组中，1000ng/L GC干预后高于500、0ng/L时，500ng/L GC干预后高于0ng/L时（P<0.05）。低糖2组中，1000ng/L GC干预后高于500、0ng/L时，500ng/L GC干预后高于0ng/L时（P<0.05）。高糖2组中，1000ng/L GC干预后高于500、0ng/L时，500ng/L GC干预后高于0ng/L时（P<0.05）； ③添加ISO前后胰岛素分泌量差值的比较：无糖时，1000ng/L GC干预后高于0ng/L时（P<0.05）；低糖时，1000ng/L GC干预后高于0ng/L时，500ng/L GC干预后高于0ng/L时（P<0.05）；高糖时，1000ng/L GC干预后高于500、0ng/L时，500ng/L GC干预后高于0ng/L时（P<0.05）。 结论： 1. GC以浓度递增的形式通过增加MIN6细胞内PKA的浓度来促进胰岛素分泌； 2. 添加刺激剂ISO后GC增加PKA及胰岛素分泌的作用更加明显，说明GC促进胰岛素分泌的作用通过第二信使信号系统PKA通路途径实现； 3. GC通过增加PKA的浓度促进胰岛素分泌的作用具有一定的葡萄糖依赖性。