mIL-21-hIgGFc融合蛋白在293E细胞中的表达纯化及其对CD8~+T细胞表型的影响

来源 :重庆医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:djldh138
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的在293E细胞中表达小鼠IL-21-hIgGFc融合蛋白,并检测该蛋白对CD8+T细胞的影响。方法运用RT-PCR方法从BAL B/c小鼠脾脏淋巴细胞扩增出IL-21基因,插入到PTT3-hIgGFc载体上,获得重组质粒PTT3-mIL-21-hIgGFc;用磷酸钙瞬时转染293E细胞,48小时和72小时后分别收集培养上清。培养上清经MOLLIPORE LabscaleTMTFF system浓缩后, protein G琼脂糖柱纯化获得mIL-21-hIgGFc融合蛋白,再用ELISA和SDS-PAGE电泳检测融合蛋白的含量和纯度。mIL-21-hIgGFc刺激P1A小鼠的CD8+T细胞,一定时间后,运用流式细胞术检测其表型改变情况。结果重组质粒PTT3-mIL-21-hIgGFc经酶切和测序确定载体构建成功,ELISA检测表明293E细胞上清中含有787ng/ml,SDS-PAGE结果显示得到了较纯的融合蛋白,纯化后获得500μg融合蛋白mIL-21-hIgGFc。融合蛋白mIL-21-hIgGFc处理P1A小鼠CD8+T细胞后,CD44lowCD62LhiCD8+T细胞明显增多,且干细胞表面标志性分子SCA-1明显增加。结论我们成功构建了PTT3-mIL21-hIgGFc重组质粒,在293E细胞中表达并纯化出mIL21-hIgGFc融合蛋白。mIL21-hIgGFc能促进CD8+T细胞向CD44lowCD62LhiCD8+记忆干细胞表型分化,这对于肿瘤过继免疫治疗方案的改进具有重要的参考意义。
其他文献
初中英语阅读是英语学科教学的灵魂,教师要重视在阅读中对信息的获取能力培养,重视对文本的解读与思考,对学生进行深层次的阅读能力的培养,达到发展学生创造思维和促进学生核
解放前,我国海洋环境预报工作几乎处于空白状态。1965年以前,沿海气象台站开展了一些近海海洋气象预报,当时的海浪预报仅是海上风预报的副产品,即根据浦氏风级、浪级对照表查
重叠式是汉语中的一种语法现象,将形容词加以重叠,表达的意思比单音节或者双音节更加形象生动。形容词重叠主要有ABB式、AABB式和ABAB式。形容词重叠式在明清小说中就出现过,
研究的目的:探索C/EBP基因在子宫颈癌组织中第一外显子突变及基因表达情况,为预防和治疗该肿瘤奠定基础;主要研究C/EBP基因突变与感染HPV16的相关性,为认识C/EBP基因在子宫颈癌中
以碳酸锂或乙酸锂、草酸亚铁和正硅酸乙酯为原料,蔗糖为碳源,乙酸为催化剂,通过溶胶·凝胶法制备前驱体,再采用固相反应法在600℃、氮气气氛中一步烧结制备了碳包覆硅酸铁锂(
初中生在英语学习过程中大多存在一定程度的焦虑,而方言较重地区由于受方言及相对落后的教学条件等客观因素影响,初中生英语学习的焦虑度普遍偏高。豫南地区属于方言较重的区
自2015年eOne的《小猪佩奇》在中国大陆开播后,它一直深受全国各地观众的喜爱。同年10月在三大视频平台—爱奇艺、优酷和土豆网上线后,《小猪佩奇》播放量已超54亿次。它成为
目的:从以下几个不同方面来分析岩斜脑膜瘤:发生位置,组织学,手术方法,并发症以及结果。可能会影响肿瘤切除范围以及以后的生活质量的可能预后因素。与国际上的经验和其他经验
胰腺导管癌(Pancreatic Ductal Adenocarcinoam, PDAC)是一种发现时间晚、高度进行性以及高度转移性并且预后极差的恶性消化道肿瘤。死亡率几乎接近发病率,其中位生存期为6个
文中介绍了一种新型转台结构,它没有复杂的传动链,采用减速电机直接驱动天线。与传统的转台型式相比,它具有结构简单、传递效率高等优点。同时,该型转台可适用于高转速场合,输出转