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本论文以鮰鱼皮明胶为原料制备ACE抑制肽。首先,以ACE抑制率为指标,研究酶解鮰鱼皮明胶制备ACE抑制肽的工艺条件;然后,通过系统的分离纯化,得到1条具有ACE抑制活性的九肽和一条十八肽;最后,对这两条肽的基本的理化特性进行测定。(1)鮰鱼皮经过脱脂及酸碱处理后用热水抽提,得到鮰鱼皮明胶。以ACE抑制率为指标,分别采用胃蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶对鮰鱼皮明胶进行水解,确定了碱性蛋白酶和胃蛋白酶作为水解明胶用酶。通过响应面优化分析,确定了碱性蛋白酶单独水解鮰鱼皮明胶制备ACE抑制肽的最佳酶解工艺条件为底物浓度5%,加酶量2.2%,pH8.0,温度50℃,酶解时间3h。水解液在碱性蛋白酶最佳酶解条件下水解3h之后,再经胃蛋白酶最适水解条件水解3h,所得明胶水解物的ACE抑制率最高,达到97.83%。(2)分别采用超滤、DEAE离子交换层析、葡聚糖G-15、半制备型RP-HPLC等对酶解液进行分离纯化,采用质谱仪器ultraflex TOF/TOF进行氨基酸序列的测定。首先使用截留分子量分别为3000Da和1000Da的超滤膜分离纯化酶解液。酶解液经超滤后被分成三个组分,Da<1000组分和1000<Da<3000组分的ACE抑制率较高,分别为82.36%和80.29%。合并收集这两个组分,使用DEAE离子交换层析对其进行分离纯化,经DEAE离子交换层析后得到三个峰,分别为F1、F2、F3,其中F3的ACE抑制率最高,为88.36%。使用葡聚糖G-15对F3进行进一步的分离纯化,得到两个峰,分别为F31和F32,其中F32的ACE抑制率较高,为89.65%。F32经半制备型RP-HPLC分离后,得到五个峰,分别为R1、R2、R3、R4和R5,其中R5的ACE抑制率最高,为90.00%。采用质谱仪器ultraflex TOF/TOF测定R5的氨基酸序列。结果表明,样品中主要含有两种具有较高ACE抑制率的多肽,分别为肽1(氨基酸序列:FTHNGYLNA,分子量817.37,IC50为0.3041mg/mL)和肽2(氨基酸序列:SNTRVSAHKHCGSYLIIN,分子量1797.95,IC50为0.8064mg/mL)。(3)对鮰鱼皮明胶ACE抑制肽的体外稳定性进行初步研究,分别考察了温度、pH及常见金属离子等对ACE抑制肽稳定性的影响。实验结果表明:ACE抑制肽具有较强的耐热性,加热到100℃时,其ACE抑制率仍能稳定在90%左右;ACE抑制肽1在碱性条件下较稳定,ACE抑制肽2在酸性条件下较稳定;常见金属离子如K+、Zn2+对ACE抑制肽1、2稳定性基本上没有影响;Ca2+浓度对ACE抑制肽1、2稳定性的影响均比较小;Mg2+浓度对ACE抑制肽1稳定性基本没有影响,对ACE抑制肽2稳定性的影响比较小。Cu2+浓度对ACE抑制肽1稳定性的影响比较小,对ACE抑制肽2稳定性基本没有影响。