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H1N1流感病毒是重要的人类季节性流感病毒,历史上曾引发两次全球大流行,而2009年春季开始全球流行的甲型H1N1流感病毒再次使H1N1流感病毒成为全球关注的热点。血凝素(HA)是流感病毒编码蛋白中与抗原性相关的最主要的蛋白,与病毒的传播、毒力、抗原性等密切相关,所以本研究选择以HA作为主要靶标来研究H1N1流感病毒的变异规律,以期为H1N1流感病毒的疫苗和治疗研究提供有用信息。首先,通过摸索流感病毒的采集标本和培养病毒对MDCK细胞的最佳感染条件,确定了一个通用的流感病毒分离和培养系统。经过长期的病毒分离工作,建立了一个包含62株病毒的H1N1流感病毒库,为后续研究奠定了工作基础。其次,利用分子进化树分析方法对1995-2009年间分离的118株H1N1流感病毒血凝素基因进行抗原性预测,根据病毒所处进化分支位置的不同,将目前H1N1病毒流行株分为Clade 0-4等五类。根据病毒所处的进化分支位置的不同,选择20株H1N1病毒代表株用于单抗的制备和鉴定。用Clade 2、4.2、4.6、4.1及禽类H1N1等五种不同变异分支的H1N1病毒为免疫原,建立了一个由52株单抗组成的H1亚型血凝素特异性单抗库。用血凝抑制试验方法(HI)分析H1单抗库对20株H1N1病毒代表株的血凝抑制活性,结果单抗可分为六类(M1-M6)。从中挑选出14株代表性单抗组成单抗盘(H1 MAb Panel)用于H1N1流感病毒的抗原性分析。结果显示这些单抗的细胞中和活性和血凝抑制活性基本一致,根据反应性的不同,14株单抗大致被为五类,代表五种不同的表位识别特征(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ)。抗原性分析结果还显示,62株H1N1流感病毒可分成四种抗原变异类型(A、B、C和D)。根据这一抗原性分类,分析病毒氨基酸位点的差异情况,发现至少有二十处氨基酸位点的突变可能与H1N1流感病毒抗原性变异有关,其中203(RBS)、205(Sb)、206(Sb)和157(接近Cal)是文献报道的HA抗原性漂移的关键位点。总之,本研究成功建立了一个H1 MAb Panel,可用于监测评估H1N1流感病毒的现有流行株和未来出现的新变异株的抗原性变异情况。最后,利用现有单抗库中52株H1亚型特异性单抗作为关键原料,建立H1N1流感病毒诊断试剂。试剂灵敏度为0.5HA,检出率为89.5%,特异性良好,可用作H1亚型流感病毒的特异性诊断。