化学发光免疫分析是结合了高灵敏度的化学发光与高特异性的免疫反应的微量分析技术。化学发光酶免疫分析是利用辣根过氧化物酶标记抗原或抗体,在体系中加入鲁米诺类物质产生发光反应,因其特异性强、灵敏度高、可实现痕量检测等特点,被广泛应用于基质中农药残留检测。甲萘威是氨基甲酸酯类农药的典型代表,具有中等毒性,在环境和农产品生产过程中易于残留,严重威胁人体健康。因此,发展和建立甲萘威的快速、高效化学发光免疫分析方法,不仅为氨基甲酸酯类农药的快速检测提供技术支撑,更为其它农药的免疫检测方法提供借鉴。本文主要的研究内容如下:1、研究甲萘威化学发光HRP-Luminol-H₂O₂体系。选择具有特异性吸附的HRP酶标记半抗原,进一步通过优化和比较发光体系的灵敏度、稳定性、检测限,建立了一种灵敏度高、特异性好甲萘威残留的直接竞争化学发光免疫分析方法。通过方阵法优化RLUmax/IC₅₀值,确定直接竞争CLEIA法抗体和酶标半抗原的最适工作浓度。结果表明:在HRP-Luminol-H₂O₂体系中,甲萘威的最适抗体包被浓度为5μg/L,最适酶标半抗原反应浓度为2.5μg/L。对甲萘威浓度和其抑制率进行拟合,回归方程为y=8.1149 ln（x）+39.883,R²=0.9703,IC₅₀为3.48μg/L,检测限0.25μg/L,线性范围0.25μg/L³10.3μg/L。利用所建立的CLEIA分析方法,在西红柿、苹果、柑橘三种基质中进行添加回收试验（0.05 mg/kg,0.1 mg/kg,0.2 mg/kg）,结果表明平均回收率（n=5）为77.0%¹19.8%,相对标准偏差（RSDs）为10.7%¹8.6%,证明该方法能够满足甲萘威检测的技术要求。2、建立甲萘威的间接竞争化学发光免疫分析方法。采用棋盘滴定法,分别优化和比较OVA-半抗原浓度,抗体和酶标二抗的稀释倍数,得到最优HRP催化鲁米诺发光体系。结果表明:OVA-半抗原包被浓度为1.0μg/L、抗体稀释32000倍、酶标二抗稀释3000倍,拟合回归方程为y=8.5552 ln（x）+40.912,R²=0.9796,IC₅₀为2.89μg/L,检测限为0.23μg/L,线性范围0.23μg/L⁴81.0μg/L。在西红柿、苹果、柑橘三种基质中进行添加回收试验（0.05 mg/kg,0.1 mg/kg,0.2 mg/kg）,平均回收率（n=5）为78.0%¹14.1%,相对标准偏差（RSDs）为10.1%¹1.8%。相比较第一部分的直接竞争免疫法,所建立的间接竞争化学发光免疫分析方法具有灵敏度高、线性范围宽等优势,能更好的满足甲萘威农药残留检测的要求。3、为了验证所建立的CLEIA方法的准确度和重复性,利用QuEChERS-GC-MS/MS方法对西红柿、苹果和柑橘样品进行添加回收试验,结果表明:GC-MS/MS分析方法的添加回收率为80.0%¹07.0%,相对标准偏差（RSDs）为3.0%⁷.6%。相比较该方法,本研究所建立的CLEIA法检测结果准确。虽然CLEIA的重复性弱于GC-MS/MS方法,但其成本低、操作方便、适合现场快速检测。